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操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)完全解凍,使細胞能盡快通過*易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
兔腦動脈平滑肌細胞 |
詳見說明書 |
FS-016500 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
主要功能:
(1)血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
(2)表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1,參與血管壁的炎癥反應(yīng)。
(3)與血管的進展和穩(wěn)定有關(guān)。
生理變化:
(1)主動脈硬化。
(2)主動脈瘤
(3)主動脈鈣化。
基本特性:
(1)組織來源于正常大鼠大動脈組織。
(2)鑒定:肌動蛋白,alpha-SMA和Desmin熒光染色。
(3)原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
(4)每凍存管細胞數(shù):>5×105 cells/1ml。
(5)肌動蛋白,alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。
(6)不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。
培養(yǎng)步驟:
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
PA-GFP(PAGFP) D-海藻糖
人鳥苷酸結(jié)合蛋白4(Gbp4)ELISA Kit 超敏型BCA法蛋白定量試劑盒
MS751細胞株 pVP33K
PinPoint Xa-2(PinPointXa2)(60908-4236) Tris-HEPES-SDS Running Buffer,10X
地塞米松 人干擾素誘導(dǎo)T細胞趨化因子(ITAC/CXCL11)ELISA Kit
SuperTOPO-Amp通用克隆試劑盒(SuperTOPO三劍客) Universal medium for yeasts (ym)
YCp8cat pEYDG1
ECFP 兔子白介素1β (IL-1β)ELISA Kit
人堿成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)ELISA Kit 一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒(100次)
枯草桿BS168種 pT7Blue
pGADT7-T (pGADT7T)(60908-3470) MOPSO Buffer,0.2M,pH7.0
6-Benzylaminopurine(6-芐基氨基嘌呤) 人S100鈣結(jié)合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)ELISA Kit
木瓜蛋白酶抑制劑溶液,0.5 mg/mL Prey seawater broth
兔腦動脈平滑肌細胞白蠟樹精 英文名稱:Fraxin 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
氧海罌堿 英文名稱:Oxygen glaucine 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
桔梗皂苷D 英文名稱:Platycodin D 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
去芹糖桔梗皂苷D 英文名稱:Deapio platycodin D 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
桔梗皂苷D2 英文名稱:Platycodin D2 規(guī)格::HPLC≥98% 10mg/支 保存::-20℃,避光
單酰酒石酸 英文名稱:Caftaric acid 規(guī)格::HPLC≥98% 5mg/支 保存::-20℃,避光
1,8-二羥基蒽醌、丹蒽醌;1,8-蒽醌 英文名稱:1, 8- two hydroxy anthraquinone, Dan anthraquinone anthraquinone; 1,8- 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
豆寇明 英文名稱:Dou Kouming 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
加蘭他敏 英文名稱:Galanthamine hydrobromide 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
蒲公英萜乙酯 英文名稱:Taraxerol acetate 規(guī)格::HPLC≥98%10mg/支 保存::-20℃,避光
西貝堿苷 英文名稱:Sipeimine glycoside 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光