細(xì)胞處理方法：

以下細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說明書僅供參考，具體操作還需要根據(jù)到貨時(shí)細(xì)胞密度，細(xì)胞生長狀態(tài)等具體情況，酌情處理，如需要更詳細(xì)技術(shù)指導(dǎo)，請(qǐng)及時(shí)電話或郵件聯(lián)系。

一．貼壁細(xì)胞

客戶接收到細(xì)胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。

肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張）。

顯微鏡觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。

1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。

產(chǎn)品名稱：角膜內(nèi)皮細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格：5×105

貨號(hào)：BH-X019921

產(chǎn)品類型：原代細(xì)胞

單位：T25/瓶

提供細(xì)胞鑒定：提供**熒光鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

二．懸浮細(xì)胞

1. 接收到細(xì)胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。

2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張）。

3. 嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒）。

5. 1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基，37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

曲霉素瓊脂(AFPA)    250(g)

Antibiotic agar No.2 GROVE and RANDALL medium No.2 瓊脂2號(hào)    1.05270.0500MERCK默克

Reinforced clostridial agar(RCM)梭狀芽孢桿加強(qiáng)瓊脂    1.05410.0500MERCK默克

Kanamycin esculin azide agar卡那霉素七葉苷疊氮瓊脂    1.05222.0500MERCK默克

MUELLER-HINTON agar .to NC

角膜內(nèi)皮細(xì)胞白喉抗體(Diphtheria Ab)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：Diphtheria Ab ELISA Kit，英文縮寫：Diphtheria Ab，產(chǎn)品別名：白喉抗體(Diphtheria Ab)ELISA檢測(cè)試劑盒，白喉抗體(Diphtheria Ab)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDHC)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：α-KGDHC ELISA Kit，英文縮寫：α-KGDHC，產(chǎn)品別名：α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDHC)ELISA檢測(cè)試劑盒，α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDHC)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

β內(nèi)酰胺酶(β-lactamase)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：β-lactamase ELISA Kit，英文縮寫：β-lactamase，產(chǎn)品別名：β內(nèi)酰胺酶(β-lactamase)ELISA檢測(cè)試劑盒，β內(nèi)酰胺酶(β-lactamase)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

T急性母白血病相關(guān)抗原(TALLA-1/CD231)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：TALLA-1/CD231 ELISA Kit，英文縮寫：TALLA-1/CD231，產(chǎn)品別名：T急性母白血病相關(guān)抗原(TALLA-1/CD231)ELISA檢測(cè)試劑盒，T急性母白血病相關(guān)抗原(TALLA-1/CD231)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

S100B蛋白(S-100B)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：S-100B ELISA Kit，英文縮寫：S-100B，產(chǎn)品別名：S100B蛋白(S-100B)ELISA檢測(cè)試劑盒，S100B蛋白(S-100B)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

L-苯丙氨酸解氨酶(PAL)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PAL ELISA Kit，英文縮寫：PAL，產(chǎn)品別名：L-苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA檢測(cè)試劑盒，L-苯丙氨酸解氨酶(PAL)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

DAB2互作蛋白(DAB2IP)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：DAB2IP ELISA Kit，英文縮寫：DAB2IP，產(chǎn)品別名：DAB2互作蛋白(DAB2IP)ELISA檢測(cè)試劑盒，DAB2互作蛋白(DAB2IP)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

CC趨化因子受體1(CCR1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CCR1 ELISA Kit，英文縮寫：CCR1，產(chǎn)品別名：CC趨化因子受體1(CCR1)ELISA檢測(cè)試劑盒，CC趨化因子受體1(CCR1)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

Ⅳ型前膠原肽(PⅣNP)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PⅣNP ELISA Kit，英文縮寫：PⅣNP，產(chǎn)品別名：Ⅳ型前膠原肽(PⅣNP)ELISA檢測(cè)試劑盒，Ⅳ型前膠原肽(PⅣNP)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

5脂加氧酶(5-LO/LOX)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：5-LO/LOX ELISA Kit，英文縮寫：5-LO/LOX，產(chǎn)品別名：5脂加氧酶(5-LO/LOX)ELISA檢測(cè)試劑盒，5脂加氧酶(5-LO/LOX)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

1,3-二磷酸甘油酸(1,3-DPG)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：1,3-DPG ELISA Kit，英文縮寫：1,3-DPG，產(chǎn)品別名：1,3-二磷酸甘油酸(1,3-DPG)ELISA檢測(cè)試劑盒，1,3-二磷酸甘油酸(1,3-DPG)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。