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iPS細(xì)胞培養(yǎng)添加劑（配套） |
5ml（復(fù)溶） |
FS-X019926 |
產(chǎn)品名稱：iPS細(xì)胞培養(yǎng)添加劑（配套）
產(chǎn)品規(guī)格：5ml（復(fù)溶）
貨號：BH-X019926
保存溫度（℃）：/-20℃
運輸溫度（℃）：/-20℃(干冰)
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
主要功能：
（1）血管平滑肌細(xì)胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
（2）表達(dá)鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應(yīng)。
（3）與血管的進(jìn)展和穩(wěn)定有關(guān)。
生理變化：
（1）主動脈硬化。
（2）主動脈瘤
（3）主動脈鈣化。
基本特性：
（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。
（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。
（3）原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（4）每凍存管細(xì)胞數(shù)：>5×105 cells/1ml。
（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。
（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。
培養(yǎng)步驟：
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
多粘素B培養(yǎng)基 250(g)
Antibiotic agar No.5 GROVE and RANDALL medium No.5瓊脂5號 1.05271.0500MERCK默克
Differential reinforced clostridial broth 梭狀芽孢桿鑒別加強肉湯 1.11699.0500MERCK默克
KING agar B base（Dank Standard）ＫＩＮＤ 瓊脂Ｂ基礎(chǔ) 1.10991.0500MERCK默克
MUELLER-HINTON br
iPS細(xì)胞培養(yǎng)添加劑（配套）Slit同源物1(Slit1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforSlitHomolog1(Slit1) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
Ⅴ型膠原α2(COL5α2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforCollagenTypeVAlpha2(COL5a2) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
尿溶蛋白3B(UPK3B)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforUroplakin3B(UPK3B) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(NOS2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforNitricOxideSynthase2,Inducible(NOS2) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
白介素3(IL3)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforInterleukin3(IL3) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforAngiotensinIConvertingEnzyme2(ACE2) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
5羥色胺轉(zhuǎn)運蛋白(SERT)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforSerotoninTransporter(SERT) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
滑行蛋白β(TXLNβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforTaxilinBeta(TXLNb) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
興奮性氨基酸轉(zhuǎn)運蛋白4(EAAT4)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforExcitatoryAminoAcidTransporter4(EAAT4) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
補體成分7(C7)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforComplementComponent7(C7) 規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。