細胞處理方法：

以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考，具體操作還需要根據(jù)到貨時細胞密度，細胞生長狀態(tài)等具體情況，酌情處理，如需要更詳細技術(shù)指導(dǎo)，請及時電話或郵件聯(lián)系。

一．貼壁細胞

客戶接收到細胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。

肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張）。

顯微鏡觀察細胞，當細胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。

將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。

用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。

1000rpm,5min離心，重懸細胞。換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學(xué)研究，作為實驗項目研究。

產(chǎn)品名稱：iPS細胞消化液（相關(guān)1）

產(chǎn)品規(guī)格：500ml

貨號：BH-X019927

保存溫度（℃）：2-8℃

運輸溫度（℃）：2-8℃

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學(xué)檢測。 

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

二．懸浮細胞

1. 接收到細胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。

2. 肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張）。

3. 嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。

4. 將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒）。

5. 1000rpm,5min離心，重懸細胞。 換新的細胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基，37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

磷酸緩沖液pH7.2    緩沖液和溶液500g

青霉素-鏈霉素

Penicillin -Steptomycin    每毫升合劑含5000U青霉素和5000U鏈霉素，保存：-5 - -20°15070-063

B群鏈球顯色培養(yǎng)基    用于從臨床標本中分離和檢測B群鏈球1000ml

脫氧膽酸鹽檸檬酸鹽瓊脂 (CM0035)    Oxoid

麥芽汁瓊脂 (CM0247)    Oxoid

沙保氏麥芽糖瓊脂 (CM0041a)    Oxoid

營養(yǎng)瓊脂（NA)    250(g)

iPS細胞消化液（相關(guān)1）甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白1(GLYT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforGlycineTransporter1(GLYT1)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

三葉因子1(TFF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforTrefoilFactor1(TFF1)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

巨噬炎性蛋白1β(MIP1β)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforMacrophageInflammatoryProtein1Beta(MIP1b)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

外皮蛋白(EVPL)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforEnvoplakin(EVPL)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

網(wǎng)狀蛋白1(RTN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforReticulon1(RTN1)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

骨骼肌特異性受體酪氨酸激酶(MUSK)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforMuscle,Skeletal,ReceptorTyrosineKinase(MUSK)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

L-型電壓依賴性鈣離子通道α1D亞基(CACNα1D)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforCalciumChannel,VoltageDependent,L-Type,Alpha1DSubunit(CACNa1D)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

Z-DNA結(jié)合蛋白1(ZBP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforZ-DNABindingProtein1(ZBP1)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

內(nèi)皮素受體B(ETRB)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforEndothelinReceptorB(ETRB)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

平足蛋白(PDPN)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforPodoplanin(PDPN)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)