細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	A431(A-431)人表皮癌細(xì)胞	英文名稱	A431(A-431):A431A431
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X645	培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；
生長特性	貼壁生長	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
組織來源	皮膚	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

細(xì)胞別稱：A431; A431/P；人表皮癌細(xì)胞

種屬來源：人

年齡性別：女性，85歲

組織來源：皮膚

生長特性：貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

背景簡(jiǎn)介：皮膚癌細(xì)胞株A-431源自一位85歲女性，是D.J.Giard等人建立的一系列細(xì)胞株中的一株。它在抗胸腺細(xì)胞球蛋白、血清處理的NIH 瑞士小鼠中形成類似于惡性黑素瘤的快速增長的皮下腫瘤，在普通成纖維細(xì)胞和瓊脂上形成克隆。這是一個(gè)超三倍體人細(xì)胞株。

生物等級(jí)：1

細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測(cè)：無

基因表達(dá)情況：

保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; CRL-1555 ATCC; CRL-7907BCRC; 60161 BCRJ; 0032 DSMZ; ACC-91 ECACC; 85090402

培養(yǎng)基：90%DMEM+10% FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

倍增時(shí)間：~80-100小時(shí)

STR鑒定位點(diǎn)Amelogenin：X；CSF1PO：11，12；D13S317：9，13；D16S539：12，14；D18S51：13，17；D19S433：15，15.2；D21S11：28；D2S1338：17，20；D3S1358：14，20；D5S818：12，13；D7S820：10；D8S1179：13；FGA：20；TH01：9；TPOX：11；vWA：15，17；

自然殺傷細(xì)胞親環(huán)素相關(guān)蛋白抗體    NKTR

G蛋白偶聯(lián)受體139抗體    GPR139

TEX261蛋白抗體  Anti-TEX261    突觸后密度蛋白93抗體  Anti-PSD93

B細(xì)胞白血病前體蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體  Anti-PBX1    類固醇5α還原酶1抗體(5α-Reductase 1)  Anti-SRD5A1

磷酸化Rho相關(guān)蛋白激酶2抗體    phospho-ROCK2 (Thr249)

嗅覺受體52J3抗體   OR52J3

WNK4抗體  Anti-WNK4    NIPAL2蛋白抗體  Anti-NIPAL2

RIT1蛋白抗體  Anti-RIT1    細(xì)胞凋亡抑制因子抗體  Anti-Survivin

大鼠阿米洛利敏感鈉通道α亞基(SCNN1A)elisa分析檢測(cè)試劑盒    SCNN1A ELISA kit

人花生四烯酸5脂氧合酶(ALOX5/LOG5)elisa分析檢測(cè)試劑盒    ALOX5/LOG5ELISAkit

小鼠解脲脲原體抗體(UU-Ab)elisa檢測(cè)試劑盒    NAD-蘋果酸酶（NAD-ME）測(cè)試盒

石蠟切片組織GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒    牛1-磷脂酰肌醇-4,5 - 二磷酸磷酸二酯酶ζ1(PLCZ1)elisa檢測(cè)試劑盒

配體依賴核受體共抑制因子樣蛋白抗體    LCORL

A431(A-431)人表皮癌細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)多聚腺苷酸結(jié)合蛋白4抗體    CPEB4

胰羧肽酶B1抗體 Carboxypeptidase B1    抑癌蛋白DKK3抗體 DKK3

多腺苷二磷酸多聚酶抗體(N端) PARP1    泛素羧基末端水解酶5互相作用蛋白1抗體 UCHL5IP

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。