細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	A529L人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞	英文名稱	GM09197：GM09197
產(chǎn)品貨號(hào)	AXB6120	培養(yǎng)條件	RPMI1640+ 10% Foetal Bovine Serum37 ℃, 5% CO2
生長(zhǎng)特性	貼壁生長(zhǎng)	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	90% FBS + 10% DMSO
組織來源	肺	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

種屬來源: 人

性別年齡： 72 歲，日本男性

組織來源: 肺

生長(zhǎng)特性： 貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài): 上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞規(guī)格: 1 X 10 6cells/T25 或 1 mL 凍存管

培養(yǎng)條件: RPMI1640+ 10% Foetal Bovine Serum37 ℃, 5% CO2

凍存條件: 90% FBS + 10% DMSO

傳代方法：1:3 傳代, 2-3 天傳 1 代

磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白16抗體 phospho-APC6 (Thr560)    磷酸化腫瘤抑制基因P53抗體 phospho-P53 (Ser33)

DNHD1蛋白抗體 DNHD1    eIF4ENIF1蛋白抗體 eIF4ENIF1

鋅指蛋白503抗體 ZNF503    鋅指蛋白81抗體 ZNF81

哺乳動(dòng)物酸性幾丁質(zhì)酶抗體 AMCase    雌受體相關(guān)蛋白3抗體 Estrogen Related Receptor gamma

視網(wǎng)膜感光細(xì)胞外節(jié)膜蛋白1抗體 ROM1    絲氨酸/精氨酸相關(guān)蛋白53抗體 RSRC1/SRrp53

PATL1蛋白抗體 PATL1   PerCP-Cy5.5標(biāo)記人CD36單克隆抗體 human CD36/PerCP-Cy5.5

組蛋白H2B重組兔單克隆抗體 Histone H2B    11號(hào)染色體開放閱讀框57抗體 C11orf57

核自身抗原精子蛋白NASP抗體 NASP    肌動(dòng)蛋白樣蛋白6B抗體 BAF53b

大鼠V-Rel網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒癌基因源物A(RELA)elisa檢測(cè)試劑盒    小鼠環(huán)孢素A(CsA)elisa檢測(cè)試劑盒

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)elisa檢測(cè)試劑盒    細(xì)胞總高氯酸萘醌（PAN）染色試劑盒

魚轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGFB1)elisa檢測(cè)試劑盒    大鼠神經(jīng)型NO合酶(nNOS)elisa檢測(cè)試劑盒

線蟲凍存試劑盒    豚鼠嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(ECP)elisa檢測(cè)試劑盒

人β膠原交聯(lián)(bCTx)elisa分析檢測(cè)試劑盒    細(xì)胞PKCζ激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）

A529L人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子前體(proNGF)elisa分析檢測(cè)試劑盒    大鼠饑餓素(GHRL)elisa檢測(cè)試劑盒

黑色素瘤相關(guān)抗原8抗體    MAGEA8

14號(hào)染色體開放閱讀框94抗體    C14orf94/HAUS4

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。