商品屬性：

產(chǎn)品名稱	A549+luc 人肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記	英文名稱	A549+luc:A549luc
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X649	培養(yǎng)條件
生長(zhǎng)特性	貼壁生長(zhǎng)	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣，多角形；
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	詳見說明
組織來源	肺癌	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞系由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系，患者為58歲白人男性。A549能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

細(xì)胞特性

1） 來源：肺癌            

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，多角形；貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1×10?  細(xì)胞數(shù)        

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝  

5） 用途：僅供科研使用

細(xì)胞誘導(dǎo)構(gòu)建實(shí)驗(yàn)步驟：

1.  轉(zhuǎn)染  （1）將A549細(xì)胞接種6孔板，每孔細(xì)胞數(shù)約為1×10? 個(gè)，

（2）天，細(xì)胞融合度為50%左右時(shí)用于病毒轉(zhuǎn)染，

（3）加入1mL培養(yǎng)基，再加20 μL Luciferase過表達(dá)慢病毒，

（4）混勻后繼續(xù)培養(yǎng)，

（5）12h后觀察細(xì)胞狀態(tài)，并更換為新鮮培養(yǎng)基，

（6）當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿板底后，傳代至T25培養(yǎng)瓶中。

2.  篩選：用嘌呤霉素4ug/mL抗性篩選6周，穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞記作A549+Luc。

3. 體外熒光素酶活性檢測(cè)

細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。
公司正在出售的產(chǎn)品：

p21激活激酶2抗體    PAK2

SEC63域內(nèi)含蛋白1抗體    HFM1

促甲狀腺素受體抗體（C端）  Anti-TSHR (CT)    胰島素促進(jìn)因子抗體（胰十二指腸源異型盒蛋白）  Anti-PDX1

蛋白酶體復(fù)合物C5抗體  Anti-PRS3/PRE7    轉(zhuǎn)錄因子蛋白SIM1抗體  Anti-SIM1

甲基（）單克隆抗體    Methamphetamine(4D2)

G蛋白偶聯(lián)受體80抗體   OXGR1/GPR80

EGF應(yīng)答因子1抗體抗體  Anti-ZFP36L1/ERF1    絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶NEK8抗體  Anti-NEK8

視黃酸受體應(yīng)答蛋白1抗體  Anti-RARRES1/TIG1    S100鈣結(jié)合蛋白A7抗體  Anti-S100A7/Psoriasin

大鼠D-甘油醛3-磷酸elisa分析檢測(cè)試劑盒    Rat D-glyceraldehyde 3-phosphate ELISA Kit

人鉤端螺旋體IgM(Lebtospira)elisa分析檢測(cè)試劑盒    HumanLebtospiraIgMELISAKit

Rac1鳥苷酸酶活性分析試劑盒    小鼠Slit2 elisa分析檢測(cè)試劑盒

大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白5(IGFBP-5)elisa檢測(cè)試劑盒    細(xì)胞NF KAPPA B P65蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒

轉(zhuǎn)錄因子MAFF抗體    MAFF

A549+luc 人肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記無精癥缺失基因1抗體    DAZ1

胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白樣1抗體    IGFBPL1

蛋白激酶A錨定蛋白6抗體    AKAP6