細胞培養(yǎng)操作:
1) 復(fù)蘇細胞:以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1ml消化液(0.25%Trypsin)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1:3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3) 細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱
英文名稱
CHO:CHO
產(chǎn)品貨號
A01X1153
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
生長特性
貼壁細胞
細胞形態(tài)
成纖維細胞樣
產(chǎn)品種屬
倉鼠
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源
卵巢
用途
僅供科研研究實驗
商品詳情:
生長特性 貼壁細胞
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
生長培養(yǎng)基 DMEM+10% FBS+1% P/S
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
溫度:37℃
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
背景描述 CHO細胞是于1957年從成年倉鼠的活組織切片中建立的一株細胞系。
年齡(性別) 雌
組織來源 卵巢
細胞類型 自發(fā)永生化細胞
生物等級 1
保藏機構(gòu) ECACC; 85050302
公司正在出售的產(chǎn)品:
CDK5和ABL1酶底物1抗體 CABLES1
DNA拓普西異構(gòu)酶Ⅱ抗體 Anti-TOPO II/TOPO II Alpha 配對盒基因7抗體 Anti-PAX7
ATP合酶亞基O抗體 OSCP
鋅指蛋白195抗體 ZSCAN5/ZNF495
鋅轉(zhuǎn)運體8蛋白抗體 Anti-ZNT8 神經(jīng)肽W抗體 Anti-NPW/Neuropeptide W
肝再生磷酸酯酶1抗體 Anti-PRL1/PTP4A1 絲氨酸/精氨酸相關(guān)核基質(zhì)蛋白2抗體 Anti-SRRM2
Dysfip1蛋白抗體 Dysferlin interacting protein 1
環(huán)指蛋白187抗體 Anti-RNF187 肌萎縮側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體 Anti-Senataxin/SETX人骨堿性磷酸酶(BALP)elisa分析檢測試劑盒 BALPELISAKit
高爾基復(fù)合體相關(guān)蛋白1抗體 ACBD3
大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)elisa分析檢測試劑盒 NAG ELISA Kit
體液基質(zhì)金屬(MMP-13)活性熒光定量檢測試劑盒 人白介素20(IL-20)elisa分析檢測試劑盒
大鼠補體片斷3(C3)elisa檢測試劑盒免費代測 小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子受體-3(VEGFR-3/Flt-4)elisa檢測試劑盒
轉(zhuǎn)化生長因子β1結(jié)合蛋白1抗體 LTBP1
CHO倉鼠卵巢細胞有絲分裂蛋白BUB3重組兔單克隆抗體 Bub3
組織胺N-甲基轉(zhuǎn)移酶抗體 HNMT
細胞傳代培養(yǎng)操作步驟:
(1)當(dāng)顯微鏡下細胞形態(tài)和生長密度達到90%時,進行傳代。
(2)吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次,搖勻后棄掉。
(3)加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
(4)培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進行消化,3min左右拿出,用顯微鏡觀察細胞有無超過80%的量,發(fā)生收縮變圓、細胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞 脫落,加入2倍量的胰蛋白酶中止消化,并吹打均勻,避免消化過度。
(5)細胞懸液吸至離心管內(nèi),1000rpm/min離心3~5min。
(6)吸棄上清,加入培養(yǎng)液重懸細胞,吹打細胞使其均勻分散。
(7)吸棄細胞懸液,選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中,補充培養(yǎng)液并搖勻,放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。
(8)根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
(9)細胞凍存。