細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	L6大鼠成肌細(xì)胞	英文名稱	L6:L6
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X1136	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%
生長(zhǎng)特性	貼壁細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	成肌細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	大鼠	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	骨胳?。怀杉〖?xì)胞	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 成肌細(xì)胞樣

生長(zhǎng)培養(yǎng)基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

背景描述 L6成肌細(xì)胞是由Yaffe從甲基膽蒽存在下大鼠大腿肌的原代培養(yǎng)物初兩代中分離得到。L6細(xì)胞在培養(yǎng)基中可融合形成多核的肌管和橫紋肌纖維。L6細(xì)胞融合的程度隨著代數(shù)的增加而下降；因而，L6細(xì)胞應(yīng)冷凍于低代次階段并周期性地重新克隆以選擇融合能力強(qiáng)的細(xì)胞。如果讓培養(yǎng)容器中的細(xì)胞長(zhǎng)滿，L6細(xì)胞的成肌組分將迅速耗盡。

組織來源 骨胳?。怀杉〖?xì)胞

細(xì)胞類型 轉(zhuǎn)化細(xì)胞系

生物等級(jí) 1

基因表達(dá)情況 myosin

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-1458 BCRJ; 0141

巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白12抗體 BBS12       斑聯(lián)蛋白抗體 Zyxin

CD299抗體 CD299       CoREST2蛋白抗體 CoREST2

線粒體核糖體蛋白S26抗體 MRPS26       小腦肽1抗體 CBLN1

周期素依賴性激酶5單克隆抗體 CDK5       轉(zhuǎn)錄源蛋白質(zhì)CUX2抗體 Cux2

MOGAT3蛋白抗體 MOGAT3       NDUFS2抗體 NDUFS2

磷酸化3磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1 Phospho-PDK1 (Ser241)       磷酸化SH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白2抗體 phospho-SH3BP2 (Ser427)

谷氧還蛋白5抗體 Glutaredoxin 5      含patatin樣磷脂酶6抗體 PNPLA6/NTE

溶質(zhì)載體家族25成員43抗體 SLC25A43       神經(jīng)細(xì)胞NB3特定蛋白抗體 Contactin 6大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子D(VEGF-D)elisa檢測(cè)試劑盒       細(xì)胞BAX蛋白表達(dá)比色法定量檢測(cè)試劑盒

1號(hào)染色體開放閱讀框186抗體       C1orf186

Ral鳥苷酸酶活性分析試劑盒       小鼠EGF樣域蛋白7(EGFL7)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠細(xì)胞功能關(guān)聯(lián)抗原2(LFA2)elisa檢測(cè)試劑盒       大鼠非轉(zhuǎn)移細(xì)胞1表達(dá)NM23A蛋白(NME1)elisa檢測(cè)試劑盒

烏頭酸酶（aconitase）活性熒光定量檢測(cè)試劑盒       人蛋白水解誘導(dǎo)因子/皮離蛋白(PIF/DCD)elisa檢測(cè)試劑盒

即用型LB液體培養(yǎng)基Amp+ 60VIA       通用型HRP復(fù)合物穩(wěn)定/稀釋溶液

L6大鼠成肌細(xì)胞小鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)elisa檢測(cè)試劑盒       大鼠Rho鳥苷酸交換因子7(Arhgef7/Pak3bp/Pixb)elisa分析檢測(cè)試劑盒

白細(xì)胞介素27抗體       IL27

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。