細(xì)胞簡介：
大鼠晶狀體上皮細(xì)胞分離自晶狀體組織；晶狀體源自胚胎發(fā)育外胚層，僅含有上皮細(xì)胞及其產(chǎn)物，晶狀體囊膜作為屏障將晶狀體與其它類型細(xì)胞完全分開；因而，晶狀體上皮細(xì)胞培養(yǎng)既無神經(jīng)和血管組織的干擾，又不受其它類型細(xì)胞如成纖維細(xì)胞的污染，保證了培養(yǎng)中細(xì)胞成分的單一性。晶狀體上皮細(xì)胞主要負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)晶狀體的生理平衡，包括電解質(zhì)和液體的輸送。在正常的發(fā)育過程中，晶狀體上皮細(xì)胞分化和成熟，然后遷移到晶狀體內(nèi)部，產(chǎn)生晶體蛋白，自身也拉長而變成晶狀體纖維細(xì)胞，并終失去細(xì)胞核和其它的細(xì)胞器。研究表明，晶狀體上皮細(xì)胞的分化和極化受到了眼部液體中的生長因子的調(diào)控，包括表皮生長因子和胰島素等。細(xì)胞貼壁后為扁平不規(guī)則多角形，呈單層生長、連成膜狀。晶狀體上皮細(xì)胞是緊密貼附于晶狀體前囊內(nèi)表面的單層上皮細(xì)胞，其異常增殖和分化與白內(nèi)障和后囊混濁的發(fā)生密切相關(guān)，體外培養(yǎng)是研究其生長規(guī)律的主要手段。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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晶狀體組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1727 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠晶狀體上皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠晶狀體上皮細(xì)胞經(jīng)BFSP2（晶狀體蛋白）熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺(tái)使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
公司正在出售的產(chǎn)品：
Mouseanti-nucleosomeantibodyIgGELISAKit
大鼠B-細(xì)胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)elisa分析檢測(cè)試劑盒
BLC-1 ELISA Kit
人肝素結(jié)合EGF樣生長因子(HBEGF)elisa分析檢測(cè)試劑盒
HumanHBEGFELISAKit
睪丸特異性Y蛋白樣5抗體 Anti-TSPYL5
GTP結(jié)合蛋白REM1抗體 Anti-REM/GTP binding protein REM1
神經(jīng)束蛋白抗體 Anti-NF/Neurofascin/NrCAM
血管內(nèi)皮生長因子B Anti-VEGFB
Hermansky-Pudlak綜合征蛋白1抗體
HPS1
卵巢、胎盤、前列腺、睪丸蛋白22抗體
ACTBL1
總膽固醇TC測(cè)定試劑盒單試劑GPO-PAP法 100管/96樣 比色法
骨髓樣品固著液（Helly或B5或Lowy FMA固著液）
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠叉頭框蛋白O1(FOXO1)elisa檢測(cè)試劑盒
原鈣粘蛋白γA12抗體
PCDHGA12
組織蛋白酶H輕連抗體
Cathepsin H light chain
死亡受體4抗體 Anti-TRAILR1/DR4/APO2
神經(jīng)相關(guān)蛋白抗體 Anti-P311 protein
乳腺癌抑制基因Protor1抗體 Anti-Protor-1
神經(jīng)細(xì)胞囊泡循環(huán)蛋白2抗體 Anti-Synaptogyrin 2
APC標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG H&L
大鼠晶狀體上皮細(xì)胞Mouse Anti-Guinea Pig IgG H&L / APC
缺氧誘導(dǎo)蛋白HIG1抗體
BRCC1; NARG 2; NARG2_HUMAN; NMDA receptor regulated protein 2; NMDA receptor-regulated protein 2
大鼠卵巢顆粒細(xì)胞
鴨胚胎成纖維細(xì)胞
Capan-2人胰腺癌細(xì)胞
ABC-1人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞