
培養(yǎng)方法與步驟:
①動(dòng)物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個(gè)乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時(shí)間不能過長(zhǎng)、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進(jìn)行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個(gè)25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標(biāo)記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時(shí),待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細(xì)胞接種后一般幾個(gè)小時(shí)內(nèi)即可貼壁,并開始生長(zhǎng)。如果無污染且細(xì)胞生長(zhǎng)良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時(shí)可補(bǔ)加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長(zhǎng)成致密單層細(xì)胞,這時(shí)可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
大鼠腎小管上皮細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來源
腎組織
生長(zhǎng)特性
貼壁
細(xì)胞形態(tài)
上皮細(xì)胞樣
分類
大鼠原代細(xì)胞
貨號(hào)
A01X1587
用途
僅供科研實(shí)驗(yàn)
培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
大鼠腎小管上皮細(xì)胞分離自腎組織;腎臟是機(jī)體的重要器官,它的基本功能是**尿液,借以體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物,同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì),如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等,以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時(shí)還有功能,**腎素、促紅細(xì)胞**素、活性維生素D3、前列腺素、激肽等,又為機(jī)體部分的降解場(chǎng)所和腎外的靶器官。腎臟的這些功能,保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,使新陳代謝得以正常進(jìn)行。腎小管是機(jī)體腎臟器官上與腎小囊壁層相連的一條細(xì)長(zhǎng)上皮性小管,具有重吸收(reabsorption)和排泌作用。腎小管按不同的形態(tài)結(jié)構(gòu)、分布位置和功能分成近端小管、髓袢和遠(yuǎn)端小管三部分;近端小管可分為直部和曲部,曲部也稱為近曲小管,位于皮質(zhì)迷路內(nèi),于腎小體附近高度蟠曲;遠(yuǎn)端小管曲部也稱為遠(yuǎn)曲小管,位于皮質(zhì)迷路內(nèi)。腎小管上皮細(xì)胞是腎小管外面的一層細(xì)胞,腎小管上皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)是研究腎臟的一項(xiàng)重要技術(shù),目前該細(xì)胞分離方法有酶分離法、化學(xué)分離法篩網(wǎng)分離法、顯微解剖分離法、流式細(xì)胞儀分離法等。腎小管上皮細(xì)胞主要功能:①腎小管上皮細(xì)胞重吸收原尿中幾乎全部的葡萄糖和氨基酸;②排泌非營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入終尿;③細(xì)胞能分泌炎癥介質(zhì)如細(xì)胞因子和趨化因子,通過產(chǎn)生IL-8或直接趨化白細(xì)胞參與急性炎癥反應(yīng);④移植腎炎癥和新月體腎炎中PTEpiC表達(dá)IL-2R和MHC-Ⅱ類抗原,這說明腎小管上皮細(xì)胞參與腎損傷的發(fā)生。隨著對(duì)腎間質(zhì)纖維化機(jī)制研究的日漸加深,腎小管上皮細(xì)胞(RTECs)在其中的作用日益被人們重視。因此,提供良好的腎小管上皮細(xì)胞模型,在腎小管間質(zhì)的發(fā)病機(jī)制和篩選的研究中是非常重要的。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎小管上皮細(xì)胞采用先機(jī)械研磨過不銹鋼網(wǎng)篩分離得到腎小管、后用膠原酶消化,結(jié)合上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎小管上皮細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-18熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品:
豬骨成型蛋白7(BMP7)elisa分析檢測(cè)試劑盒
腫瘤壞死因子C/β抗體
Lymphotoxin Beta
細(xì)胞色素P450 2C11抗體
Cytochrome P450 2C11
人層粘連蛋白β1(LN-β1)elisa分析檢測(cè)試劑盒
PH2-3顯色(CRESOL RED)指示溶液
小鼠整合素α5(Itgax/CD11c)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1(ECE1)elisa檢測(cè)試劑盒
OTUD7A蛋白抗體
OTUD7A
血紅蛋白γ2抗體
Hemoglobin subunit gamma 2
轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子α抗體(TGFα) Anti-TGF alpha
粘著斑激酶抗體 Anti-FAK/PTK2
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體 Anti-phospho-AMPK beta 1 (Ser182)
轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子DEC2抗體 Anti-SHARP1/DEC2
激肽原1重鏈抗體
Lysyl-bradykinin
嗅覺受體ai1抗體
Orai1
鋅指蛋白195抗體 Anti-ZNF195
神經(jīng)調(diào)節(jié)肽S抗體 Anti-NMS/Neuromedin S
RNA結(jié)合蛋白38抗體 Anti-RBM38
腦磺基轉(zhuǎn)移酶樣蛋白4A1抗體 Anti-SULT4A1
大鼠Kelch樣ECH相關(guān)蛋白1(KEAP1)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠腎小管上皮細(xì)胞KEAP1 ELISA kit
人谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶TT(GSTπ)elisa分析檢測(cè)試劑盒
5-beta-cholestane-3-alpha, 7-alpha, 12-alpha-triol 26-hydroxylase; 5-beta-cholestane-3-alpha, 7-alpha, 12-alpha-triol 27-hydroxylase; 5-beta-cholestane-3-alpha,7-alpha,12-alpha-triol 27-hydroxylase; Cholestanetriol 26 monooxygenase; CP27; CTX; CYP; CYP27; Cytochrome P 450C27/25; Cytochrome P450 27; Cytochrome P450 27 mitochondrial; Cytochrome P450 family 27 subfamily A polypeptide 1; CP27A_HUMAN; Cytochrome P450 subfamily XXVIIA (steroid 27-hydroxylase cerebrotendinous xanthomatosis) polypeptide 1; Sterol 26 hydroxylase; Sterol 26 hydroxylase mitochondrial; Sterol 27 hydroxylase; Vitamin D(3) 25 hydroxylase.
大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞
小鼠牙齦成纖維細(xì)胞
GES-1人胃粘膜細(xì)胞
BCL2 Jurkat兒童急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞
原代細(xì)胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對(duì)新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時(shí)間根據(jù)腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時(shí),用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過濾細(xì)胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。