實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
大鼠輸卵管上皮細(xì)胞分離自輸卵管組織；輸卵管位于底兩側(cè)，包裹在闊韌帶上緣內(nèi)。自兩角分別伸展至左、右卵巢，是輸送卵細(xì)胞進(jìn)入的管道，也是卵受精的場所。輸卵管主要分漏斗部、壺腹部、峽部和部，管壁均由粘膜、肌層和漿膜三層組成。粘膜形成許多縱行而分支的皺襞，壺腹部的皺襞，高而多分支，故管腔不規(guī)則；至部的皺襞漸減少。粘膜上皮為單層柱狀。由纖毛細(xì)胞和分泌細(xì)胞組成。纖毛細(xì)胞以漏斗部和壺腹部多，至峽部和部逐漸減少，纖毛向方向擺動，使卵移向并阻止病菌進(jìn)入腹膜腔.分泌細(xì)胞表面有微絨毛，頂部胞質(zhì)內(nèi)有分泌顆粒，其分泌物構(gòu)成輸卵管液。輸卵管上皮細(xì)胞在卵巢雌和孕的作用下，隨月經(jīng)周期而有變化。雌促進(jìn)輸卵管上皮細(xì)胞的生長的功能活動，在內(nèi)膜增生晚期（排卵前）。纖毛細(xì)胞變成高柱狀，纖毛增多，分泌細(xì)胞頂部充滿分泌顆粒，功能旺盛。至分泌晚期，兩種細(xì)胞均變矮，分泌細(xì)胞的分泌顆粒排空，纖毛細(xì)胞的纖毛也減少。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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輸卵管 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1626 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
培養(yǎng)信息：
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
大鼠輸卵管上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介：
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠輸卵管上皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠輸卵管上皮細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-18熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠白介素3(IL-3)elisa檢測試劑盒
人胰島素（INS）elisa檢測試劑盒
酵母菌YNBA培養(yǎng)基
魚卵泡刺(FSH)elisa分析檢測試劑盒
大鼠瘦素(LEP)elisa檢測試劑盒
多配體聚糖4抗體 Anti-Syndecan 4
RAN結(jié)合蛋白3抗體 Anti-RanBP3
Noxa蛋白抗體 Anti-Noxa
鋅指蛋白ZBBX抗體 Anti-ZBBX
細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶CABLES2抗體 CABLES2
線粒體核糖體蛋白L44抗體 MRPL44
β防御素3抗體 beta Defensin 3
氨基丁酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白VGAT抗體 SLC32A 1
BCL2相關(guān)蛋白A1抗體 Bcl2A1
CD174抗體 CD174/FUT3
激酶C-SRC抗體 CSK
磷酸二酯酶6α抗體 PDE6A
腫瘤/睪丸抗原家族4亞型7抗體 GAGE7
周期素D相互作用蛋白1抗體 DMTF1
高爾基體卷曲螺旋蛋白2抗體 GCC2
谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶M2抗體 GSTM2
LITD1蛋白抗體 LITD1
MFSD5蛋白抗體 MFSD5
人CD86單克隆抗體 human CD86
溶質(zhì)載體家族蛋白32成員A1抗體 SLC32A1
大鼠活化素A(ACV-A)elisa檢測試劑盒
大鼠輸卵管上皮細(xì)胞小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 3(Eotaxin 3)elisa分析檢測試劑盒
人REST協(xié)阻抑因子3(RCOR3)elisa檢測試劑盒
FOXB1+FOXB2; FKH5; forkhead box B2; Forkhead box protein B1; Forkhead box protein B2; Transcription factor FKH 5; FOXB1_HUMAN; FOXB2_HUMAN.
大鼠輸尿管上皮細(xì)胞
小鼠杏仁核神經(jīng)元細(xì)胞
HCMEC/D3永生化人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞
BEWO人胎盤絨毛膜癌細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。