實驗方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞分離自胃黏膜組織；胃黏膜柔軟，活體呈橘紅色。胃空虛時形成許多皺襞，充盈時變平坦。幽門處的黏膜形成環(huán)形皺襞，突向腔內(nèi)稱幽門瓣。胃黏膜可分為三層，即上皮層（單層柱狀上皮）、固有層（由結(jié)締組織構(gòu)成、含有大量的胃腺）和黏膜肌層（為薄層平滑肌、排列成內(nèi)環(huán)外縱）。胃黏膜上皮細(xì)胞源自胃黏膜的上皮層，細(xì)胞為單層柱狀上皮，排列整齊，能分泌黏液覆蓋于胃黏膜的表面，防止胃酸和胃蛋白酶對胃黏膜的損害。體外培養(yǎng)胃黏膜上皮細(xì)胞為研究細(xì)胞功能及致病因子、、對細(xì)胞的損傷、保護和功能調(diào)控提供了簡單而的模型。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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胃組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1557 |
僅供科研研究實驗 |
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實驗室分離的大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-18熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人多巴胺(DA)elisa檢測試劑盒
甲型流感H7N7 HA elisa分析檢測試劑盒
溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性比色法定量檢測試劑盒
小鼠肥大細(xì)胞類胰蛋白酶(MCT)elisa檢測試劑盒
大鼠α2巨球蛋白(α2-MG)elisa檢測試劑盒
神經(jīng)細(xì)胞特異性微管蛋白抗體 Anti-TUBB3/beta III Tubulin(Neuronal Marker)
RAS癌基因家族蛋白RAB40A抗體 Anti-RAB40A
脂質(zhì)運載蛋白抗體 Anti-NGAL/Lipocalin 2
線粒體外膜孔蛋白3抗體（電壓依賴陰離子通道蛋白3） Anti-VDAC3
腺病毒早期E1A蛋白抗體 Adenovirus 5 E1A
心臟鉀離子通道蛋白亞基2抗體 KCNG2
白介素2受體γ鏈抗體 IL-2R gamma
胞苷尿苷鳥苷結(jié)合蛋白1抗體 CUG-BP1
CD5單克隆抗體 CD5
CYP27B1單克隆抗體 CYP27B1
磷酸化Ets轉(zhuǎn)錄因子家族ets1抗體 phospho-ETS1 (Thr38)
磷酸化叉頭蛋白O6抗體 phospho-FOXO6 (Ser184)
豬水腫病-志賀樣Ⅱ型變異體A抗體 Shiga-like toxin IIe variant subunit A
轉(zhuǎn)錄因子LHX6抗體 LHX6
光導(dǎo)蛋白樣蛋白PDCL3抗體 PDCL3
核過渡蛋白2抗體 STP2
MYCNOS蛋白抗體 MYCNOS
NMDA受體調(diào)節(jié)1抗體 NARG1
溶質(zhì)載體轉(zhuǎn)運蛋白家族35成員B4抗體 SLC35B4
神經(jīng)誘導(dǎo)胚胎發(fā)育相關(guān)蛋白Churchill抗體 CHURC1
脂類代謝檢測試劑專題
大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞小鼠MAP激酶活化蛋白激酶2(MAPKAPK2)elisa檢測試劑盒
大鼠血小板衍生生長因子B(PDGFB)elisa檢測試劑盒
1 alpha 25 dihydroxyvitamin D3 inducible; DDVit 1; DDVIT1; EDAF-1; EDAF1; EDPF-1; EDPF1; Enterocyte differentiation associated factor EDAF 1; Enterocyte differentiation promoting factor; Enterocyte differentiation-associated factor 1; Enterocyte differentiation-promoting factor 1; Methyl methanesulfonate sensitive 2; MMS 2; MMS2; MMS2 homolog; UB2V2_HUMAN; UBE2V 2; UBE2V2; Ubiquitin conjugating enzyme E2 variant 2; Ubiquitin conjugating enzyme E2v2; Ubiquitin-conjugating enzyme E2 variant 2; UEV 2; UEV2; Vitamin D3 inducible protein; Vitamin D3-inducible protein.
大鼠胃平滑肌細(xì)胞
小鼠心肌細(xì)胞
HEK-293（293）人胚腎細(xì)胞
BICR 22人頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時間根據(jù)正常細(xì)胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細(xì)胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細(xì)胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。