實驗方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
兔睪丸支持細(xì)胞分離自睪丸；睪丸支持細(xì)胞又稱Sertoli細(xì)胞，在體內(nèi)呈不規(guī)則的高錐體形，細(xì)胞基部附著在基膜上，頂部伸至曲精小管腔面。它是生精細(xì)胞的支架，為其提供必需的營養(yǎng)物質(zhì)，能合成與分泌雄結(jié)合蛋白，為其提供高濃度的雄環(huán)境等，還具有構(gòu)成血-睪屏障，形成睪丸內(nèi)微環(huán)境，調(diào)節(jié)精子發(fā)生等功能。睪丸支持細(xì)胞是睪丸的主要組成細(xì)胞，能分泌多種生長因子和抑制因子，不僅可為精子提供營養(yǎng)支持和保護(hù)，也能對其他細(xì)胞，如胰島和神經(jīng)細(xì)胞提供營養(yǎng)支持，而且當(dāng)其與胰島或神經(jīng)細(xì)胞共移植時，也能夠為這些細(xì)胞提供保護(hù)，提高植活率。因此，睪丸支持細(xì)胞在細(xì)胞移植中具有廣泛的應(yīng)用前景。制備高活率的Sertoli不僅對Sertoli的基礎(chǔ)研究有重要價值，而且在精子發(fā)生等領(lǐng)域有重要意義。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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睪丸 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2114 |
僅供科研研究實驗 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔睪丸支持細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介：
實驗室分離的兔睪丸支持細(xì)胞采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的兔睪丸支持細(xì)胞經(jīng)Fas-L熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
MCP1ELISAKit
大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)elisa分析檢測試劑盒
HMGB-1 ELISA Kit
豚鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)elisa分析檢測試劑盒
OVAsIgGELISAKit
小鼠核因子κB(NF-κB)elisa檢測試劑盒
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人體E-Cadherin基因甲基化檢測試劑盒
人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)elisa分析檢測試劑盒
猴超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)elisa分析檢測試劑盒
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人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶2家族肽B4(UGT2B4)elisa分析檢測試劑盒
UGT2B4ELISAKit
犀牛皮質(zhì)酮(CORT)elisa分析檢測試劑盒
大鼠激動異構(gòu)酶/細(xì)胞分裂素MB(CKMB)elisa分析檢測試劑盒
細(xì)胞TIE2激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
人抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）elisa檢測試劑盒
莫洛尼白血病病毒10樣蛋白1抗體
MOV10L1
嗜酸性粒細(xì)胞陽離子型核糖核酸酶5抗體
Ear5
跨膜蛋白TMED4抗體 Anti-TMED4
環(huán)指蛋白5抗體（E3泛素蛋白連接酶RNF5） Anti-RING5
谷氨酸受體3A+3B抗體 Anti-NMDAR3A + 3B
維生素D結(jié)合蛋白抗體 Anti-Vitamin D Binding protein
PE標(biāo)記的兔抗雞IgG H&L
兔睪丸支持細(xì)胞Rabbit Anti-Chicken IgG H&L / PE
Endokinin-A/B抗體
ATP:glycerol 3 phosphotransferase; GK; GK3; GKP3; GKTB; Glycerokinase 3; Glycerokinase; Glycerol kinase testis specific 1; Glycerol kinase 3 pseudogene; Putative glycerol kinase 3; GK 3; ATP:glycerol 3-phosphotransferase 3.
兔鞏膜成纖維細(xì)胞
小鼠冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞
PANC10.05人胰腺癌細(xì)胞
F81貓腎細(xì)胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時間根據(jù)正常細(xì)胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細(xì)胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。