
培養(yǎng)方法與步驟:
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺內(nèi)進行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標(biāo)記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細胞生長良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞,這時可進行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
兔骨骼肌微血管內(nèi)皮細胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
組織來源
骨骼肌
生長特性
貼壁
細胞形態(tài)
內(nèi)皮細胞樣
分類
兔原代細胞
貨號
A01X2164
用途
僅供科研實驗
培養(yǎng)信息:
包被條件:PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):內(nèi)皮細胞樣
傳代特性:可傳2-3代
消化液:0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔骨骼肌微血管內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞簡介:
兔骨骼肌微血管內(nèi)皮細胞分離自四肢肌肉組織;骨骼肌又稱橫紋肌,肌肉中的一種,約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長柱形的多核細胞,肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌,橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌,其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的器官,有豐富的血管、分布,在軀體神經(jīng)支配下收縮或舒張,進行隨意運動。微血管又稱。分布于各種組織和細胞間的微細的血管。介于微動脈和微靜脈之間。平均直徑7-9微米,數(shù)量極多,成網(wǎng)狀分布。管壁由一層內(nèi)皮細胞及一薄層基膜組成,厚約0.5微米?;ね饷嬗斜咏Y(jié)締組織,其中有纖維細胞、巨噬細胞和周細胞等。細的微血管由一個內(nèi)皮細胞圍成管腔,較粗的微血管由2-3個內(nèi)皮細胞圍成。分布于肌肉組織、神經(jīng)組織和結(jié)締組織中的微血管,內(nèi)皮細胞間為縫隙連接(縫隙寬150埃),稱連續(xù)微血管。血管內(nèi)皮細胞在器官和組織的結(jié)構(gòu)和功能上起著非常重要的作用。并與多種的發(fā)生與發(fā)展有關(guān)。近年來血管內(nèi)皮細胞在炎癥、休克等一系列病理生理改變中的重要性愈來愈受到人們的重視。研究發(fā)現(xiàn),不同來源的內(nèi)皮細胞在生物學(xué)特征、結(jié)構(gòu)和功能等方面均存在一定差別,而同是微血管內(nèi)皮細胞,它們又存在器官和組織的特異性。骨骼肌組織是動物體內(nèi)含量多的組織,肌肉組織供血豐富,是研究內(nèi)皮細胞功能和血管**的理想靶組織。
方法簡介:
實驗室分離的兔骨骼肌微血管內(nèi)皮細胞采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法、培養(yǎng)基篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔骨骼肌微血管內(nèi)皮細胞經(jīng)CD31熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品:
石蠟切片脂質(zhì)尼羅紅間接染色試劑盒
癌/睪丸抗原83抗體
KK-LC-1/CT83
碳水化合物磺基轉(zhuǎn)移酶12抗體
CHST12
小鼠程序性死亡1(PD-1)elisa檢測試劑盒
大鼠CD68分子(CD68)elisa分析檢測試劑盒
Cr. Neoformans RFLP基因分析試劑盒
人B-細胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)elisa分析檢測試劑盒
NADH氧化還原酶輔酶2抗體
NDUFA2
γ氨基丁酸受體相關(guān)蛋白樣3抗體
GABARAPL3
硫氧還蛋白11抗體 Anti-TXNDC11
前列腺素E2抗體 Anti-PGE2
眼部白化病相關(guān)蛋白OA1/蛋白偶聯(lián)受體143抗體 Anti-OA1/GPR143
5-脂氧合酶抗體 Anti-5 lipoxygenase
干擾素α17抗體
Interferon alpha 17
神經(jīng)囊泡膜蛋白1抗體
NRSN1
腦視網(wǎng)膜血管瘤G7蛋白抗體(逢希伯-林道氏?。?span> Anti-VHL/HRCA1
NFkB誘導(dǎo)激酶抗體 Anti-NIK/MAPKKK14
絲氨酸羧肽酶1抗體 Anti-RISC/Serine carboxypeptidase 1
河豚單克隆抗體 Anti-TTX(5E7)
大鼠補體蛋白3(C3)elisa分析檢測試劑盒
兔骨骼肌微血管內(nèi)皮細胞C3 ELISA Kit
人極低密度脂蛋白(VLDL)elisa分析檢測試劑盒
R2; Ribonucleoside-diphosphate reductase subunit M2; Ribonucleotide reductase M2 subunit; Ribonucleotide reductase small chain; Ribonucleotide reductase small subunit; RIR2_HUMAN; RR2; RR2M; RRM2.
兔骨骼肌細胞
小鼠骨髓巨噬細胞
PATU8988t(PATU8988)人胰腺癌細胞
G422小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細胞
原代細胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時間根據(jù)腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。