
產(chǎn)品名稱
兔脊髓微血管內(nèi)皮細胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
組織來源
脊髓:
生長特性
貼壁
細胞形態(tài)
內(nèi)皮細胞樣
分類
兔原代細胞
貨號
A01X2188
用途
僅供科研實驗
培養(yǎng)信息:
包被條件:PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養(yǎng)基:含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):內(nèi)皮細胞樣
傳代特性:可傳2-3代
消化液:0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔脊髓微血管內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞簡介:
兔脊髓微血管內(nèi)皮細胞分離自脊髓組織;脊髓是細細的管束狀的神經(jīng)結(jié)構(gòu),位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護;是源自腦的神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。神經(jīng)系統(tǒng)的細胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息。人和脊椎動物神經(jīng)系統(tǒng)的一部分,在椎管里面,上端連接延髓,兩旁發(fā)出成對的神經(jīng),分布到四肢、體壁和內(nèi)臟。脊髓的內(nèi)部有一個H形(蝴蝶型)灰質(zhì)區(qū),主要由神經(jīng)細胞構(gòu)成;在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū),主要由有髓神經(jīng)纖維組成;脊髓是許多簡單反射的。脊髓兩旁發(fā)出許多成對的神經(jīng)(稱為脊神經(jīng))分布到全身皮膚、肌肉和內(nèi)臟器官。微血管又稱。分布于各種組織和細胞間的微細的血管。介于微動脈和微靜脈之間。平均直徑7-9微米,數(shù)量極多,成網(wǎng)狀分布。管壁由一層內(nèi)皮細胞及一薄層基膜組成,厚約0.5微米?;ね饷嬗斜咏Y(jié)締組織,其中有纖維細胞、巨噬細胞和周細胞等。細的由一個內(nèi)皮細胞圍成管腔,較粗的由2-3個內(nèi)皮細胞圍成。分布于肌肉組織、神經(jīng)組織和結(jié)締組織中的,內(nèi)皮細胞間為縫隙連接(縫隙寬150埃),稱連續(xù);分布于腺、腎臟等處的,除有縫隙連接外,細胞本身有許多小孔,(孔徑800-1000埃),稱有孔;分布于肝、脾、骨髓及某些腺的,管腔擴大,稱血竇。的管壁薄、通透性大、管徑細(8-10微米)、數(shù)量多、血流速度慢,這些特點使其成為血液與組織液進行物質(zhì)交換的場所,又稱交換血管。血竇(sinusoid)由管腔擴大而成,竇壁的一般結(jié)構(gòu)與壁相同,由單層內(nèi)皮細胞構(gòu)成,內(nèi)皮細胞膜上有窗孔。不同器官的竇壁結(jié)構(gòu)各有差別。脾血竇的內(nèi)皮細胞間有較寬裂隙;肝血竇內(nèi)皮細胞是不連續(xù)的,有較寬的細胞隙(0.1-0.5微米);肝、脾血竇的基膜不完整或無基膜,通透性比大,較大的蛋白質(zhì)和血細胞可以通過。肝血竇壁內(nèi)有枯否細胞,脾血竇內(nèi)外有巨噬細胞,這兩種細胞都有吞噬能力,可吞噬血液中的異物、等有害物質(zhì),是機體單核巨噬細胞系統(tǒng)的重要組成分。某些腺的血竇有連續(xù)的基膜。
方法簡介:
實驗室分離的兔脊髓微血管內(nèi)皮細胞采用中性蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔脊髓微血管內(nèi)皮細胞經(jīng)CD31熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺內(nèi)進行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標(biāo)記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細胞生長良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞,這時可進行傳代培養(yǎng)。
原代細胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時間根據(jù)腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

公司正在出售的產(chǎn)品:
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兔脊髓星形膠質(zhì)細胞
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