實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
兔乳腺上皮細胞分離自乳腺組織；乳腺是復管泡狀皮膚腺，主要由腺上皮細胞組成，并具有特殊的泌乳功能。在妊娠期，導管末梢發(fā)育成腺泡；近年來的許多研究都表明乳腺癌、乳腺炎等的發(fā)生都與乳腺上皮細胞（MEC）有密切聯(lián)系，體外分離培養(yǎng)MECs即成為研究開展的關鍵步驟。乳腺是的腺體組織，乳腺由導管和腺泡組成，腺泡是分泌乳汁的重要部分。乳腺的正常發(fā)育是由體內和局部合成的生長因子共同調控，其中乳腺表達的生長因子對乳腺上皮細胞的增殖、分化、凋亡產生極大的影響。乳腺上皮細胞分離自分娩后3-5天的乳腺組織，為貼壁生長型細胞，呈多角形、圓形以及短梭形；乳腺上皮細胞主要功能即生乳功能。
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組織來源 |
產品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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乳腺組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2123 |
僅供科研研究實驗 |
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實驗室分離的兔乳腺上皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法，并通過上皮細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的兔乳腺上皮細胞經Cytokeratin-18熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產品：
SP-CELISAkit
血清淀粉樣蛋白A(SAA)elisa分析檢測試劑盒
SAA ELISA Kit
人蛋白水解誘導因子/皮離蛋白(PIF/DCD)elisa分析檢測試劑盒
HumanPIF/DCDELISAKit
小鼠核仁素(NCL)elisa檢測試劑盒
大鼠白介素5(IL－5)elisa檢測試劑盒
冰凍切片非特異性酯酶（Non-specific esterase）活性
人β內啡肽受體(β-EPR)elisa分析檢測試劑盒
JRK蛋白抗體
JRK
凋亡素抗體
apoptin
大鼠補體因子B(CFB)elisa檢測試劑盒
小鼠血管**素樣蛋白3(ANGPTL3)elisa檢測試劑盒
人白介素24(IL-24)elisa分析檢測試劑盒
細胞長鏈烯脂酰水合酶（ENOYL COA HYDRATASE）活性比色法定量檢測試劑盒
RecQ解旋酶樣蛋白5抗體
RECQL5
中心體蛋白104抗體
CEP104
上調基因4抗體（C端） Anti-URG4 (C terminal)
原鈣粘蛋白β4抗體 Anti-PCDHB4
原鈣粘蛋白β2抗體 Anti-PCDHB2
尿皮質素UCN3抗體 Anti-Urocortin 3
PE-Cy3標記的羊抗小鼠IgG H&L
兔乳腺上皮細胞Goat Anti-Mouse IgG H&L / PE-Cy3
鋅指蛋白103抗體
DRD4; DRD4 receptor; D4 dopamine receptor; DRD4_HUMAN.
兔軟骨細胞
小鼠垂體細胞
SW480人結腸腺癌細胞
HCC827+LUC人非小細胞肺癌細胞熒光素酶標記
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經過的心臟破碎組織塊經過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。