
培養(yǎng)方法與步驟:
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進(jìn)行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標(biāo)記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細(xì)胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細(xì)胞生長良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細(xì)胞,這時可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
兔三叉神經(jīng)元細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來源
三叉神經(jīng)
生長特性
貼壁
細(xì)胞形態(tài)
神經(jīng)元細(xì)胞樣
分類
兔原代細(xì)胞
貨號
A01X2210
用途
僅供科研實驗
培養(yǎng)信息:
包被條件:PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基:含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):神經(jīng)元細(xì)胞樣
傳代特性:屬于終末分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群
消化液:0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔三叉神經(jīng)元細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞簡介:
兔三叉神經(jīng)元細(xì)胞分離自三叉神經(jīng)組織;三叉神經(jīng)為粗大的混合性腦神經(jīng),含一般軀體感覺和特殊內(nèi)臟運動兩種纖維。其特殊內(nèi)臟運動纖維起于腦橋中段的三叉神經(jīng)運動核,纖維組成三叉神經(jīng)運動根,由腦橋基底部與腦橋臂交界處出腦,位于感覺根下內(nèi)側(cè),后進(jìn)入三叉神經(jīng)第3支下頜神經(jīng)中,經(jīng)卵圓孔出顱,隨下頜神經(jīng)分支分布于咀嚼肌等。運動根內(nèi)還含有三叉神經(jīng)中腦核有關(guān)的纖維,主要傳導(dǎo)咀嚼肌的本體感覺。三叉神經(jīng)內(nèi)以軀體感覺神經(jīng)纖維為主,這些纖維的細(xì)胞體位于三叉神經(jīng)節(jié)(半月節(jié))內(nèi),該神經(jīng)節(jié)位于顱中窩顴骨巖部的前面三叉神經(jīng)壓跡處,為硬腦膜形成的美克爾腔包裹。三叉神經(jīng)節(jié)由假單極神經(jīng)元組成,其突集中構(gòu)成了粗大的三叉神經(jīng)感覺根,由腦橋基底部與腦橋臂交界處入腦,止于三叉神經(jīng)諸感覺核,其中傳導(dǎo)痛溫覺的纖維主要終止于三叉神經(jīng)脊束核;傳導(dǎo)觸覺的纖維主要終止于三叉神經(jīng)腦橋核。三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的周圍突組成三叉神經(jīng)三大分支,即第1支眼神經(jīng)、第2支上頜神經(jīng)、第3支為下頜神經(jīng)。從3大分支不斷分支分布于面部皮膚、眼及眶內(nèi)、口腔、鼻腔、鼻旁竇的粘膜、牙、腦膜等,傳導(dǎo)痛、溫、觸等多種感覺。
方法簡介:
實驗室分離的兔三叉神經(jīng)元細(xì)胞采用胰蛋白酶消化法結(jié)合神經(jīng)元培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔三叉神經(jīng)元細(xì)胞經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠補體因子B(CFB)elisa檢測試劑盒
神經(jīng)元蛋白提取試劑盒50T
正常人體腎組織微粒體組分(5毫克/毫升)
糖原含量測試盒
大鼠維生素D3(VD3)elisa檢測試劑盒
小鼠二肽基肽酶4(DPP4/CD26)elisa檢測試劑盒
大鼠白介素-9(IL-9)elisa檢測試劑盒
三色(MGT) 染色試劑盒
人β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)elisa檢測試劑盒
線粒體鈣吸收蛋白單克隆抗體 CBARA1/MICU1
腺苷酸環(huán)化酶9抗體 ADCY9
癌胚抗原單克隆抗體(檢測) CEA(B5)
白細(xì)胞介素-13受體a1抗體 IL13RA1
CARD9單克隆抗體 CARD9
CD8重組兔單克隆抗體 CD8
細(xì)胞趨化因子CCL2抗體 CCL2
磷酸化KB抑制蛋白β抗體 Phospho-IKB beta (Ser23)
重組非洲豬瘟p72蛋白 ASFV p72
轉(zhuǎn)化生長因子β1結(jié)合蛋白1抗體 LTBP1
谷氨酸脫羧酶-65單克隆抗體 GAD65
果蠅GAPDH(內(nèi)參)抗體 GAPDH (Fruit Fly, Loading Control)
MD-2蛋白抗體 LY-96/MD2
NADH氧化還原酶輔酶2抗體 NDUFA2
溶血磷脂酰甘油?;D(zhuǎn)移酶1抗體 LPGAT1
軟骨衍生形態(tài)發(fā)生蛋白1/GDF 5抗體 CDMP1
大鼠堿性鞘磷脂磷酸二酯酶(Alk-Smase)elisa檢測試劑盒
兔三叉神經(jīng)元細(xì)胞小鼠微管蛋白β3(TUBB3)elisa檢測試劑盒
人β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)elisa分析檢測試劑盒
IFN alpha 7; IFN alpha J1; IFN alphaJ; IFN-alpha-7; IFN-alpha-J1; IFNA 7; IFNA J; IFNA7; IFNA7_HUMAN; Interferon alpha 7; Interferon alpha family, gene 7; Interferon alpha J; Interferon alpha J1; Interferon alpha-7; Interferon alpha-J; Interferon alpha-J1; LeIF J; OTTHUMP00000021136; OTTMUSP00000012102; RP23-139P14.26.
兔神經(jīng)干細(xì)胞
小鼠腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞
SW620人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
HCC-LM3人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞
原代細(xì)胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時間根據(jù)腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過濾細(xì)胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。