實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
小鼠氣管上皮細(xì)胞分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當(dāng)胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個半環(huán)狀軟骨構(gòu)成，有彈性，軟骨為“C”字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。管腔襯以粘膜，表面覆蓋纖毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動將粘液與灰塵排出，以凈化吸入的氣體。氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的道防線，不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細(xì)胞，還作為效應(yīng)細(xì)胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子從而參與氣道炎癥及反應(yīng)。體外培養(yǎng)的原代氣管上皮細(xì)胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上存在很大的相似性，因此，在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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氣管 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1765 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠氣管上皮細(xì)胞采用-中性蛋白酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠氣管上皮細(xì)胞經(jīng)PCK熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
通用型雞鼠傷（ST）基因檢測試劑盒
組織AX1激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
人抵抗素(Resistin)elisa分析檢測試劑盒
大鼠復(fù)制蛋白A 70kDaDNA結(jié)合亞基(RPA1)elisa檢測試劑盒
乙醛脫氫酶（ALDH）試劑盒
小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(ELA2)elisa檢測試劑盒
大鼠腦紅蛋白(NGB)elisa檢測試劑盒
大量藍(lán)藻菌基因組DNA氯化銫萃取試劑盒
兔8-異構(gòu)前列腺素(8-epi-PGF2α)elisa分析檢測試劑盒
乳糖酶根皮苷水解酶1抗體 LCT
上皮細(xì)胞癌轉(zhuǎn)化蛋白2抗體 ECT2
LYSMD4蛋白抗體 LYSMD4
MRVI1蛋白抗體 MRVI1
腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子3相互作用蛋白1抗體 TRAF3IP1
軸索過度生長抑制因子B抗體 Nogo B
睪丸特異蛋白酶樣蛋白50抗體 TSP50
骨形態(tài)發(fā)生蛋白15抗體 BMP15
線粒體核糖體蛋白S24抗體 MRPS24
小腦變性相關(guān)蛋白2抗體 CDR2
巴豆酰組蛋白H2B重組兔單克隆抗體 Histone H2B (Crotonyl-Lys15 / Lys16 / Lys20)
白血病抑制因子抗體 LIF
CD27重組兔單克隆抗體 CD27
COPT2抗體 COPT2
磷酸化220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗體 phospho-Kidins220 (Ser918)
磷酸化蛋白激酶9抗體 phospho-PTK9 (Tyr321)
小鼠可溶性E選擇素(sE-selectin)elisa檢測試劑盒
小鼠氣管上皮細(xì)胞大鼠S100蛋白(S-100)elisa檢測試劑盒
透射電鏡（TEM）制片處理包埋液
Alpha L iduronate sulfate sulfatase; Alpha-L-iduronate sulfate sulfatase; AW214631; Ids; IDS_HUMAN; Iduronate 2 sulfatase 14 kDa chain; Iduronate 2 sulfatase 42 kDa chain; Iduronate 2 sulfatase; Iduronate 2-sulfatase 14 kDa chain; Iduronate sulfatase; Idursulfase; MPS2; RP23-29M4.1; SIDS.
小鼠前列腺成纖維細(xì)胞
兔前脂肪細(xì)胞
RM-1小鼠前列腺癌細(xì)胞
Ishikawa人內(nèi)膜腺癌細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。