
培養(yǎng)方法與步驟:
①動(dòng)物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個(gè)乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行無(wú)菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進(jìn)行一次背部,再用的解剖剪剪開(kāi)背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開(kāi)腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過(guò)毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個(gè)25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標(biāo)記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時(shí),待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來(lái)),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細(xì)胞接種后一般幾個(gè)小時(shí)內(nèi)即可貼壁,并開(kāi)始生長(zhǎng)。如果無(wú)污染且細(xì)胞生長(zhǎng)良好,可見(jiàn)培養(yǎng)液顏色由原來(lái)的橘紅色變成黃色,此時(shí)可補(bǔ)加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長(zhǎng)成致密單層細(xì)胞,這時(shí)可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
小鼠食管上皮細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來(lái)源
食管組織
生長(zhǎng)特性
貼壁
細(xì)胞形態(tài)
上皮細(xì)胞樣
分類
小鼠原代細(xì)胞
貨號(hào)
A01X1799
用途
僅供科研實(shí)驗(yàn)
培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠食管上皮細(xì)胞分離自食管組織;食管是咽和胃之間的消化管,食管在系統(tǒng)發(fā)生上起初很短,隨著頸部的伸長(zhǎng)和心肺的下降,而逐漸增長(zhǎng)。食管可分為頸段、胸段和腹段。脊椎動(dòng)物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端,胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi),胸段通過(guò)膈孔與腹腔內(nèi)腹相連,腹段很短與胃相連。在發(fā)育過(guò)程中,食管的上皮細(xì)胞增殖,由單層變?yōu)閺?fù)層,食管使管腔變狹窄,甚至一度閉鎖,以后管腔又重新出現(xiàn)。哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層:黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中,黏膜層,包括上皮、固有層和黏膜肌層。上皮為較厚的未角化的復(fù)層扁平上皮,耐摩擦,有保護(hù)作用。在食管與胃賁門交界處,復(fù)層扁平上皮突然變成單層柱狀上皮。食管被一層線性排列的、無(wú)角化、潮濕的復(fù)層扁平上皮細(xì)胞覆蓋,其頂端細(xì)胞膜和細(xì)胞間連接復(fù)合體聯(lián)合在一起產(chǎn)生有效滲透屏障,防止食管內(nèi)容物的滲入。特別的是,層屏障使表層細(xì)胞的基質(zhì)外側(cè)細(xì)胞膜和深層細(xì)胞的全部細(xì)胞膜不暴露于食管腔內(nèi)規(guī)律的大幅波動(dòng)的滲透壓之下。從組織學(xué)上講,食管上皮由兩層組成,基底層和分化層;其中,僅基底層的細(xì)胞可以增殖,然后向食管腔移行。移行過(guò)程伴隨有分化的發(fā)生和分化標(biāo)記的依序表達(dá)。食管上皮細(xì)胞的培養(yǎng)是研究食管正常生理機(jī)制和食管癌變機(jī)制的非常好的體外模型。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠食管上皮細(xì)胞采用機(jī)械分離法結(jié)合組織貼塊法,并通過(guò)上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠食管上皮細(xì)胞經(jīng)PCK熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠白細(xì)胞介素3(IL-3)elisa檢測(cè)試劑盒
倉(cāng)鼠心肌肌鈣蛋白I(TNNI3)elisa檢測(cè)試劑盒
冰凍切片組織CYTOCHROME C蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒
牛血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)elisa分析檢測(cè)試劑盒
魚(yú)Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4(NT-4)elisa檢測(cè)試劑盒
組織人體腺病毒(adenovirus)定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒
豚鼠內(nèi)皮素1(EDN1)elisa檢測(cè)試劑盒
20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框117抗體 C20orf117
3號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框58抗體 C3orf58
肌球蛋白5A抗體 MYO5A
激活素A受體1B抗體 ACVR1B
PRDM鋅指轉(zhuǎn)錄因子PRDM13抗體 PRDM13
ras癌基因家族RAB20單克隆抗體 RAB20
絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶16抗體 STK16
絲裂原活化蛋白激酶MKK7抗體 MEK7
FER1L5蛋白抗體 FER1L5
FITC標(biāo)記小鼠CD69單克隆抗體 mouse CD69/FITC
磷脂酰肌醇激酶催化亞單位A抗體 PIK3CA
毛細(xì)管形態(tài)發(fā)生蛋白1抗體 CMG1
蛋白酶調(diào)解因子7抗體 PSMD7
凋亡相關(guān)蛋白7抗體 PDCD7
信號(hào)誘導(dǎo)增殖相關(guān)蛋白1抗體 SIPA1
氧化還原酶NDOR1抗體 NDOR1
大鼠載脂蛋白B48(Apo B48)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠食管上皮細(xì)胞動(dòng)物組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒
豚鼠巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)elisa檢測(cè)試劑盒
60S acidic ribosomal protein P1; p32; p34; REPA2; Replication factor A protein 2; Replication protein A 32 kDa subunit; Replication protein A 32kDa subunit; Replication protein A 34 kDa subunit; Replication protein A; Replication Protein A2 (32kDa); Replication protein A2; Replication protein A2, 32kDa; RF-A protein 2; Rf-A2; RFA; RFA2_HUMAN; RP-A p32; RP-A p34; RP21C; RPA 2; RPA 32; RPA; Rpa2; RPA32; RPA34; RpLP1; RpP2.
小鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞
兔內(nèi)皮祖細(xì)胞
H9C2大鼠心肌細(xì)胞
KASUMI-1人紅白血病細(xì)胞
原代細(xì)胞步驟:
1. 在無(wú)菌條件下的冰上對(duì)新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無(wú)菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時(shí)間根據(jù)腫瘤組織來(lái)定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時(shí),用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。