
培養(yǎng)方法與步驟:
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進(jìn)行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標(biāo)記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細(xì)胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細(xì)胞生長良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補(bǔ)加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細(xì)胞,這時可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
小鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來源
視網(wǎng)膜組織
生長特性
貼壁
細(xì)胞形態(tài)
成纖維細(xì)胞樣
分類
小鼠原代細(xì)胞
貨號
A01X1992
用途
僅供科研實(shí)驗(yàn)
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每3-4天換液一次;
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代左右;
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞簡介:
小鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織;視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層,是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成,兩層間在病理情況下可分開,稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連,由色素上皮細(xì)胞組成,它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層,由外向內(nèi)分別為:色素上皮層、視錐、視桿細(xì)胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、神經(jīng)纖維層、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜,有感光作用;后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個神經(jīng)元組成。神經(jīng)元是視細(xì)胞層,專司感光,它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上,而視錐細(xì)胞則在中心凹處多。層叫雙節(jié)細(xì)胞,約有10到數(shù)百個視細(xì)胞通過雙節(jié)細(xì)胞與一個神經(jīng)節(jié)細(xì)胞相聯(lián)系,負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細(xì)胞層,專管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu),它貼于眼球的后壁部,傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面,經(jīng)由視神經(jīng)到達(dá)出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的,在黃斑區(qū),其分辨能力強(qiáng)。它是組成血管腔面單層扁平上皮樣細(xì)胞,它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用,在視網(wǎng)膜血管的發(fā)病機(jī)制中有重要病理生理學(xué)意義。周細(xì)胞(pericyte)又稱Rouget細(xì)胞和壁細(xì)胞,是一種包圍全身和靜脈中內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞,可以收縮。周細(xì)胞嵌入內(nèi)皮細(xì)胞的基膜中,通過物理接觸和旁分泌信號與內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞通訊,監(jiān)視和穩(wěn)定內(nèi)皮細(xì)胞的成熟過程。此外,周細(xì)胞還具有調(diào)控血流量、細(xì)胞碎屑和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用,其多功能性是目前研究的熱點(diǎn)之一,所以對血管周細(xì)胞的生物學(xué)特征、標(biāo)記物、細(xì)胞功能等的研究都為相關(guān)研究提供基礎(chǔ)資料。周細(xì)胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控的血流量。周細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間共同擁有一個基膜,基膜上有多種細(xì)胞連接,包括多種整合素、神經(jīng)鈣黏素、纖連蛋白以及接合素。它還參與直徑的雙向調(diào)控;受損時,周細(xì)胞還可增殖,分化為內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。
方法簡介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞采用中性蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞經(jīng)α-SMA熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品:
DNA末端平滑補(bǔ)缺位素([35S]dATP)聚合酶標(biāo)記試劑盒
細(xì)胞肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶II(CARNITINE PALMITOYL-TRANSFERASE II)活性比色法定量檢測試劑盒
人和肽素(copeptin)elisa分析檢測試劑盒
大鼠環(huán)加氧酶2(COX-2)elisa檢測試劑盒
植物跨膜蛋白提取試劑盒100T
魚熱休克蛋白90(HSP-90)elisa檢測試劑盒
大鼠水通道蛋白5(AQP-5)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測
酵母菌SD-URA培養(yǎng)基
細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測試劑盒100T
神經(jīng)生長調(diào)節(jié)蛋白1抗體 NEGR1
神經(jīng)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體 NDNF
NBPF6蛋白抗體 NBPF6
NXF5蛋白抗體 NXF5
轉(zhuǎn)錄激活蛋白crsp70抗體 APC70
轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF4抗體 TEF4
過氧化物酶-2單克隆抗體 PRDX2
核仁自身抗原SC65抗體 SC65
鋅指蛋白127抗體 ZNF127
鋅指蛋白423抗體 ZNF423
胞吐分泌蛋白Sec6抗體 EXOC3
補(bǔ)體C4d-A蛋白抗體 C4d-A
DCN1樣蛋白4抗體 DCUN1D4
DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄樣蛋白4抗體 DDIT4L
磷酸化蛋白激酶AKT底物1抗體 Phospho-AKT1S1 (Thr246)
磷酸化三羥基基輔酶A還原酶抗體 phospho-HMGCR (Ser872)
小鼠生長(GH)elisa檢測試劑盒
小鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞大鼠白介素8(IL-8/CXCL8)elisa檢測試劑盒
冰凍切片神經(jīng)纖維銀染試劑盒
Interleukin-1 receptor antagonist; ICIL 1RA; IL1 inhibitor; ICIL1RA; IL1F3; IL1RN; IRAP; IL1RA_HUMAN; IL1RA_MOUSE.
小鼠輸尿管上皮細(xì)胞
兔腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞
KG-1a人急性髓性白血病細(xì)胞
原代細(xì)胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時間根據(jù)腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過濾細(xì)胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。