細(xì)胞簡介：
小鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自心臟組織；心臟是脊椎動(dòng)物身體中重要的一個(gè)器官，主要功能是為血液流動(dòng)提供壓力，把血液運(yùn)行至身體各個(gè)部分。心臟由心肌構(gòu)成，左心房、左心室、右心房、右心室四個(gè)腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開，故互不相通，心房與心室之間有瓣膜（房室瓣），這些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心臟的作用是推動(dòng)血液流動(dòng)，向器官、組織提供充足的血流量，以供應(yīng)氧和各種營養(yǎng)物質(zhì)，并帶走代謝的終產(chǎn)物（如二氧化碳、無機(jī)鹽、尿素和尿酸等），使細(xì)胞維持正常的代謝和功能。心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞是組成心臟微血管腔面單層扁平上皮樣細(xì)胞，它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用，在心臟血管的發(fā)病機(jī)制中有重要病理生理學(xué)意義。近年來大量研究表明，心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能和病理改變直接影響心肌細(xì)胞功能，也是諸多、炎癥因子及病毒等重要靶位，其作為體外研究的細(xì)胞模型在心肌缺血-再灌注發(fā)病機(jī)制和細(xì)胞間旁分泌細(xì)胞生長因子研究中起著重要作用。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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心臟組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1791 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
公司正在出售的產(chǎn)品：
IFN-β/IFNBELISAKit
魚11-酮睪酮(KT)elisa分析檢測試劑盒
KT ELISA Kit
人吡哆醛/吡哆醇維生素B6磷酸酶(PDXP)elisa分析檢測試劑盒
PDXPELISAKit
蛋白提取/檢測
大鼠調(diào)節(jié)激活正常T-細(xì)胞表達(dá)分泌因子(RANTES)elisa檢測試劑盒
高多糖多酚植物組織葉綠體DNA高純分離試劑盒
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ/琥珀酸-輔酶Q還原酶測試盒
宮頸癌原癌基因2抗體
LETMD1
β內(nèi)酰胺酶抗體
beta lactamase TEM
SYF2蛋白抗體 Anti-SYF2
RRAD抗體 Anti-RRAD
干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子NANOGP8抗體 Anti-NANOGP8
鋅指蛋白ZBTB12抗體 Anti-ZBTB12
鉀氯離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3抗體
SLC12A6
CPAMD8蛋白抗體
CPAMD8
突觸囊泡蛋白抗體 Anti-SYNPR/Synaptoporin
蛋白激酶A調(diào)節(jié)亞基a1抗體 Anti-PRKAR1
腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體1抗體 Anti-PACAP R1/PACAP receptor 1
磷酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體 Anti-Phospho-TORC2 (Ser171)
兔抗小鼠IgG H&L抗血清
小鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞Rabbit Anti-Mouse IgG H&L whole serum
鋅指蛋白786抗體
Carcinoembryonic antigen like 1; Carcinoembryonic antigen like 1 antibody Carcinoembryonic antigen related cell adhesion molecule 19; Carcinoembryonic antigen related cell adhesion molecule 19; CEA related cell adhesion molecule 19; CEAL1; MGC105097; CEA19_HUMAN.
小鼠胸腺上皮細(xì)胞
兔卵巢顆粒細(xì)胞
RBL-2H3大鼠嗜堿性白血病細(xì)胞
KNS-89人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞