
培養(yǎng)方法與步驟:
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進(jìn)行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標(biāo)記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細(xì)胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細(xì)胞生長良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細(xì)胞,這時可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
小鼠胰島細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來源
胰腺組織
生長特性
貼壁
細(xì)胞形態(tài)
梭形、多角形
分類
小鼠原代細(xì)胞
貨號
A01X1856
用途
僅供科研實驗
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞簡介:
小鼠胰島細(xì)胞分離自胰腺組織;胰腺分為外分泌腺和腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成,腺泡分泌胰液,腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通過胰腺管排入十二指腸,有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成,胰島主要由4種細(xì)胞組成:α細(xì)胞、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞分泌胰高血糖素,升高血糖;β細(xì)胞分泌胰島素,降低血糖;γ細(xì)胞分泌,以旁分泌的方式抑制α、β細(xì)胞的分泌;PP細(xì)胞分泌胰多肽,抑制胃腸運動、胰液分泌和膽囊收縮。胰島細(xì)胞作為糖尿病新藥的細(xì)胞篩選模型需保持其結(jié)構(gòu)完整、生理功能穩(wěn)定和足夠長的存活時間。胰島占胰腺總質(zhì)量的1%-2%,每個胰島大概含有1000個細(xì)胞。胰島移植可消除常規(guī)產(chǎn)生的嚴(yán)重低血糖癥狀,具有創(chuàng)傷小及并發(fā)癥少等優(yōu)點,是有前景的Ⅰ型糖尿病方案。移植胰島的獲得需經(jīng)過供體篩選、胰腺消化、胰島分離純化及結(jié)果鑒定等步驟,分離純化效果取決于原料及操作方法的選擇。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠胰島細(xì)胞采用膠原酶灌注消化法結(jié)合密度梯度離心法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的小鼠胰島細(xì)胞經(jīng)DTZ染色檢測,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品:
5’核苷酸酶EC3.1.3.5 1 KU/瓶
Kelch樣蛋白14抗體
KLHL14
鈣和整合素結(jié)合蛋白4抗體
CIB4
細(xì)胞/組織活性高爾基體分離試劑盒
大鼠無翅型MMTV整合位點家族成員3A(WNT3A)elisa檢測試劑盒
細(xì)胞色素P450亞酶CYP2E1(MFC)活性熒光定量檢測試劑盒
小鼠8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)elisa檢測試劑盒
NDUFAF6蛋白抗體
NDUFAF6
甘丙肽受體拮抗劑抗體
Galantide
味覺感受器蛋白T2R6抗體 Anti-TAS2R7/T2R6
血小板源性生長因子受體β樣蛋白抗體 Anti-PDGFRL
外致密纖維蛋白3B抗體 Anti-ODF3B
14-3-3 protein ζ/δ抗體 Anti-14-3-3 zeta/delta
磷酸化原癌基因CBL2抗體
phospho-CBL(Tyr674)
核斑點剪接調(diào)控蛋白1抗體
NSRP1
血管粘附蛋白1抗體 Anti-VAP1
膜相關(guān)磷脂轉(zhuǎn)運蛋白抗體 Anti-NIR1/RDGBA3
類風(fēng)濕因子抗體 Anti-RF/Rheumatoid Factor
TRIM35蛋白抗體 Anti-TRIM35
大鼠丙二醛(MDA)elisa分析檢測試劑盒
小鼠胰島細(xì)胞MDA ELISA Kit
人激肽釋放酶10(KLK 10)elisa分析檢測試劑盒
Cannabinoid Receptor I; CANN 6; CANN6; Cannabinoid receptor I brain; CB 1; CB R; CB1; CB1A; CB1K5; CbR; Central cannabinoid receptor; Central cannabinoid receptor isoform a; Central cannabinoid receptor isoform b; CNR 1; CNR; CNR-1; CNR1_HUMAN.
小鼠胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞
兔結(jié)膜上皮細(xì)胞
大鼠骨髓瘤細(xì)胞;IR983F
KYSE-270人食管鱗狀癌細(xì)胞
原代細(xì)胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時間根據(jù)腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過濾細(xì)胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。