
培養(yǎng)方法與步驟:
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺內(nèi)進行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細胞生長良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞,這時可進行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
小鼠主動脈內(nèi)皮細胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
組織來源
主動脈組織
生長特性
貼壁
細胞形態(tài)
內(nèi)皮細胞樣
分類
小鼠原代細胞
貨號
A01X1776
用途
僅供科研實驗
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞簡介:
小鼠主動脈內(nèi)皮細胞分離自主動脈組織;主動脈是體循環(huán)的動脈主干。其運行路徑為:升主動脈起于左心室,至右側(cè)第2胸肋關(guān)節(jié)高度移行為主動脈弓,弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動脈;在第12胸椎體高度穿膈的主動脈裂孔移行為腹主動脈,以上為胸主動脈,至第4腰椎體下緣分為左、右髂總動脈;髂總動脈在骶髂關(guān)節(jié)高度分為髂內(nèi)、外動脈。主動脈內(nèi)皮細胞是覆蓋在主動脈內(nèi)面的單層細胞,可分泌一系列血管活性物質(zhì)而保持血管穩(wěn)態(tài),當其受到炎癥或其它因素刺激后穩(wěn)態(tài)被破壞而導致一些心血管的發(fā)生。因此,主動脈內(nèi)皮細胞已成為研究心血管發(fā)病機制及的工具。內(nèi)皮細胞或血管內(nèi)皮是一薄層的專門上皮細胞,由一層扁平細胞所組成。它形成血管的內(nèi)壁,是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁(單層鱗狀上皮)的接口。內(nèi)皮細胞是沿著整個循環(huán)系統(tǒng),由心臟直至小的微血管。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠主動脈內(nèi)皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的小鼠主動脈內(nèi)皮細胞經(jīng)CD31熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠溶質(zhì)載體家族30成員10(SLC30A10)elisa檢測試劑盒
小鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)elisa分析檢測試劑盒
AMP含量測試盒
細胞CASPASE-3蛋白表達比色法定量檢測試劑盒
脂蛋白酯酶(LPL)測試盒
豬多肽YY(PYY)elisa檢測試劑盒
大鼠血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶(ACE)elisa檢測試劑盒
啤酒糟β-葡聚糖含量化學比色法定量檢測試劑盒
小鼠CXC趨化因子配體16(CXCL16)elisa分析檢測試劑盒
砷酸鹽耐藥蛋白ARS2抗體 ARS2
神經(jīng)細胞鳥苷酸置換因子NGEF抗體 Ephexin-1
Myc tag標簽單克隆抗體 Myc Tag
NLRP14蛋白抗體 NLRP14
豬藍耳病病毒N蛋白抗體 PRRSV-N protein
轉(zhuǎn)錄因子KLF9抗體 KLF9
冠狀病毒表面S蛋白抗體 SARS S-protein
核苷轉(zhuǎn)運蛋白ENT1抗體 ENT1
小鼠抗瘦素單克隆抗體 Leptin
鋅指蛋白275抗體 ZFP275
半胱胺酸蛋白酶蛋白9-p10抗體 caspase-9 p10
丙酮酸脫氫酶激酶亞型2抗體 PDK2
CTAGE6蛋白抗體 CTAGE6
DNAJC5G蛋白抗體 DNAJC5G
磷酸化γ連環(huán)蛋白抗體 phospho-gamma Catenin (Tyr550)
磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體 phospho-ACLY (Ser455)
大鼠血管性血友病因子抗原vWF:Agelisa檢測試劑盒
小鼠主動脈內(nèi)皮細胞純化線粒體凍存液(生物能量學保護)
苯丙氨酸解氨酶PAL測試盒 50T/48樣 比色法
Interleukin 17F; Cytokine ML-1; IL-17F; IL17F_HUMAN; Interleukin-17F; CANDF6; ML1.
小鼠主動脈平滑肌細胞
兔角膜上皮細胞
CHL中國倉鼠肺細胞
L929小鼠成纖維細胞
原代細胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時間根據(jù)腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。