實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
自然殺傷細胞 (natural killer cell，NK)是機體重要的細胞，不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和調(diào)節(jié)有關(guān)，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身性的發(fā)生。一種穩(wěn)定表達在NK和LAK細胞表面的LAK-1分子，120kDa，NK細胞在IL-2條件下培養(yǎng)20天LAK-1仍為陽性，而HNK-1(CD57）和CD16部分消失。LAK的殺傷活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。
自然殺傷細胞刺激因子（ natural killer cell stimulatory factor,NKSF) 對NK細胞有刺激作
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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外周血組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1686 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常外周血組織。
2)細胞鑒定：CD56或CD16熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：圓形或橢圓形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代 NK 細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
血液5’－核苷酸酶（5’－NT）活性比色法定量檢測試劑盒
賴氨酸特異性脫甲基酶4B重組兔單克隆抗體
KDM4B
神經(jīng)酰胺激酶CERK抗體
CERK
豬球蛋白M(IgM)elisa檢測試劑盒
大鼠血栓前體蛋白(TpP)elisa檢測試劑盒
L－乳酸待測樣品處理試劑盒
小鼠GTP酶 KRas elisa檢測試劑盒
NAGPA蛋白抗體
NAGPA
FLJ39060蛋白抗體
FLJ39060
共濟失調(diào)擴張癥D相關(guān)蛋白抗體 Anti-TRIM29/ATDC
磷酸化粘著斑激酶抗體 Anti-phospho-PTK2(Tyr576+Tyr577)
衰老相關(guān)Sigma受體蛋白抗體 Anti-Sigma1R/OPRS1/Sigma Receptor
信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5抗體 Anti-STAT5
多效生長因子抗體
Pleiotrophin
嗅球蛋白1抗體
Noelin
重組豬細小VP2蛋白抗體 Anti-VP2
胞質(zhì)5'核苷酸酶1A抗體 Anti-NT5C1A
細胞生長抑制蛋白34 Anti-RPL11/GIG34
肺癌抑癌蛋白1抗體 Anti-TUSC1
大鼠促腎上腺皮質(zhì)(ACTH)elisa分析檢測試劑盒
大鼠NK細胞小鼠雌二醇（E2）elisa檢測試劑盒
二代測序快速DNA建庫試劑盒for Illumina 24次
Cytosolic malic enzyme 1; HUMNDME; Malate dehydrogenase; Malic enzyme 1; Malic enzyme 1, NADP(+) dependent, cytosolic; Malic enzyme 1, soluble; Malic enzyme, cytoplasmic; MES; NADP dependent malic enzyme; NADP ME; Pyruvic malic carboxylase.Cytosolic malic enzyme 1; HUMNDME; Malate dehydrogenase; Malic enzyme 1; Malic enzyme 1, NADP(+) dependent, cytosolic; Malic enzyme 1, soluble; Malic enzyme, cytoplasmic; MES; NADP dependent malic enzyme; NADP ME; Pyruvic malic carboxylase.
大鼠NK細胞
兔脊髓成纖維細胞
DH-82狗腎惡性組織細胞增生癥細胞
Lenti-X293T人腎上皮細胞系
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。