實驗方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
垂體是機體的重要的腺體，由生長**和促腎上腺皮質(zhì)**細(xì)胞等細(xì)胞構(gòu)成，在機體的生長發(fā)育、生命活動、調(diào)節(jié)以及衰老死亡過程中起著重要意義。因此，垂體細(xì)胞的體外培養(yǎng)為進一步研究垂體與生殖的神經(jīng)調(diào)節(jié)機制及垂體移植研究等方面提供了基礎(chǔ)和前提。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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垂體組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1611 |
僅供科研研究實驗 |
細(xì)胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常垂體組織。
2)細(xì)胞鑒定：LH、FSH與PRL熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長方式：梭形或多角形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
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公司正在出售的產(chǎn)品：
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倉鼠白介素8(IL-8/CXCL8)elisa分析檢測試劑盒
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組織副傷B（Salmonella Paratyphi B）定性基因檢測試劑盒
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細(xì)胞PP2A蛋白表達流式細(xì)胞儀檢測試劑盒
Rab27a蛋白抗體
Rab27a
跨膜結(jié)構(gòu)域邊緣蛋白CEE抗體
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泛素蛋白連接酶E1抗體 Anti-UBCH6/UBE2E1
蛋白酶激活受體4抗體 Anti-PAR4
石骨癥相關(guān)蛋白PLEKHM1抗體 Anti-PLEKHM1
T細(xì)胞激活蛋白抗體 Anti-Sca1/Ly6A/E
膠體金標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG H&L
大鼠垂體細(xì)胞大鼠兒茶酚胺(CA)elisa檢測試劑盒
組織a-（a-AMYLASE）活性EPS-G7酶偶聯(lián)比色法定量檢測試劑盒
UNQ9415; Apoptosis related cysteine protease; CASP 12; casp12; CASP12P1; Caspase 12 pseudogene 1; CASP-12; casp12; caspase 12 (gene/pseudogene); Caspase12; CASPC_HUMAN; OTTHUMP00000207026; OTTHUMP00000207028; OTTHUMP00000207031; OTTHUMP00000207032; OTTHUMP00000219058; UNQ9415.
大鼠垂體細(xì)胞
兔海綿體內(nèi)皮細(xì)胞
MDCK狗腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞
LMH雞肝癌細(xì)胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時間根據(jù)正常細(xì)胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細(xì)胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細(xì)胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。