培養(yǎng)方法與步驟：
①動(dòng)物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個(gè)乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時(shí)間不能過長(zhǎng)、以免酒精從口浸入體內(nèi)，影響培養(yǎng)）后迅速置于的培養(yǎng)皿中，帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行無菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進(jìn)行一次背部，再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚，剖開腹部，取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中，除去其他連帶組織，用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除，然后將肝組織反復(fù)剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個(gè)25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。
⑤培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)，使瓶底向上，加入1~2 ml培養(yǎng)液，擰緊瓶蓋，做好標(biāo)記，置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時(shí)，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來），另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài)，繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察：細(xì)胞接種后一般幾個(gè)小時(shí)內(nèi)即可貼壁，并開始生長(zhǎng)。如果無污染且細(xì)胞生長(zhǎng)良好，可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色，此時(shí)可補(bǔ)加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長(zhǎng)成致密單層細(xì)胞，這時(shí)可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
大鼠結(jié)膜上皮細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來源
眼球。
生長(zhǎng)特性
貼壁培養(yǎng)
細(xì)胞形態(tài)
扁平的橢圓形、梭形或不規(guī)則形
分類
大鼠原代細(xì)胞
貨號(hào)
A01X1729
用途
僅供科研實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞特性：
1）組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的眼球。
2)細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：扁平的橢圓形、梭形或不規(guī)則形，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代 上皮 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
結(jié)膜上皮是眼表的重要組成部分，是眼表的保護(hù)屏障，在維持淚膜的穩(wěn)定性、潤(rùn)滑眼表、維持正常視力和眼表上皮損傷修復(fù)中發(fā)揮重要作用。上世紀(jì) 90 年代，隨著人們對(duì)眼表的深入研究，提出了結(jié)膜上皮干細(xì)胞的概念，認(rèn)為結(jié)膜上皮細(xì)胞的自我更新來自結(jié)膜上皮干細(xì)胞。
公司正在出售的產(chǎn)品：
直腸腫瘤標(biāo)記K－ras糞便檢測(cè)突變巢式分析試劑盒
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16號(hào)染色體開放閱讀框48抗體
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腺苷受體蛋白抗體
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磷酯酶Cγ2抗體 Anti-PLCG 2/PLC gamma 2
蛋白激酶C抗體 Anti-PKC epsilon
跨膜蛋白SEMA4G抗體 Anti-SEMA4G
FITC標(biāo)記的兔抗人IgG H&L F(ab')2
Rabbit Anti-Human IgG F(ab')? / FITC
ECSIT蛋白抗體
ECSIT
鋅指蛋白211抗體 Anti-ZNF211
鼻咽上皮細(xì)胞特異性蛋白1抗體 Anti-NESG1/CCDC19
RAM-11抗體 Anti-Rab27a
軸突導(dǎo)向因子SEMA6D抗體 Anti-SEMA6D
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大鼠結(jié)膜上皮細(xì)胞鴨環(huán)磷酸腺苷(cAMP)elisa檢測(cè)試劑盒
人蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP 9.5)elisa分析檢測(cè)試劑盒
DKFZp781P1017; Lost on transformation 1; Lost on Transformation; LOT-1; LOT1; MGC126275; MGC126276; PLAG like 1; PLAGL1; PLAL1_HUMAN; Pleiomorphic adenoma gene like 1; Pleiomorphic adenoma gene like protein 1; Pleiomorphic adenoma-like protein 1; Tumor supressor ZAC; ZAC; ZAC tumor supressor; ZAC1; Zinc finger protein PLAGL1.
大鼠結(jié)膜上皮細(xì)胞
兔腹腔主動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞
ECV-304人膀胱癌細(xì)胞
MA-104恒河猴腎細(xì)胞
原代細(xì)胞步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對(duì)新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次，消化時(shí)間根據(jù)腫瘤組織來定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時(shí)，用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過濾細(xì)胞，收集；
6. 用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。