實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
臍帶血是胎兒出生時(shí)臍帶內(nèi)及胎盤近胎兒一側(cè)血管內(nèi)的血液。臍帶血中含有多種成分。目前，臍帶血已經(jīng)成為公認(rèn)的造血干細(xì)胞的重要來源之一。此外，臍帶血中還含有豐富的間充質(zhì)干細(xì)胞。
臍帶血中的干細(xì)胞含量豐富，明顯超過外周血含量，相當(dāng)或超過骨髓中的含量，其間充質(zhì)干細(xì)胞因其可以在體外誘導(dǎo)分化為多種組織細(xì)胞，以再生和修復(fù)病變或損傷的組織細(xì)胞，因此目前的應(yīng)用比較廣泛。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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臍血。 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1759 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1） 細(xì)胞來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的臍血。
2) 細(xì)胞鑒定：CD44熒光染色為陽性。
3) 細(xì)胞純度： 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5) 細(xì)胞生長方式：梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 delf原代間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為該細(xì)胞的體外培養(yǎng)試劑。
公司正在出售的產(chǎn)品：
半乳糖總含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測(cè)試劑盒
活體細(xì)胞半胱13（CASPASE-13）活性原位熒光染色檢測(cè)試劑盒
葡萄糖含量測(cè)試盒
總巰基檢測(cè)試劑盒（Ellman法）50樣/100T
小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)elisa分析檢測(cè)試劑盒
轉(zhuǎn)化生長因子β1誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子1抗體 Anti-TGFB1I1/HIC5
反義導(dǎo)向分子RGMC抗體 Anti-RGMC/Repulsive Guidance Molecule C
神經(jīng)纖毛蛋白2抗體 Anti-Neuropilin-2/NRP2
血管抑制蛋白1抗體 Anti-VASH1
腦發(fā)育源蛋白2抗體 DBX2
鳥苷酸環(huán)化酶激活蛋白3抗體 GCAP3
FITC標(biāo)記心肌肌鈣蛋白單克隆抗體 Troponin C (cTnC), FITC conjugated
GCOM1蛋白抗體 GCOM1/GRINL1A
氧固醇結(jié)合蛋白樣5抗體 OSBPL5
乙醇脫氫酶1重組兔單克隆抗體 ADH1A
頂膜鈉依賴性膽鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體 SLC10A2
耳聾常染色體顯性遺傳相關(guān)蛋白1抗體 DIAPH1
源盒亮氨酸拉鏈蛋白HOMEZ抗體 Homez
拓普西異構(gòu)酶Ⅰ單克隆抗體 Topoisomerase I
RNA結(jié)合蛋白26抗體 RBM26
SCAND3蛋白抗體 SCAND3
6號(hào)染色體開放閱讀框64抗體 C6orf64
ABI基因家族成員3結(jié)合蛋白抗體 ABI3BP
甲狀旁腺(激)素及類似物抗體 TIP39
解旋酶SNF2L抗體 SNF2L
小鼠白介素28A(IL-28A)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞小鼠巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)elisa分析檢測(cè)試劑盒
綿羊甲狀腺素(T4)elisa分析檢測(cè)試劑盒
HEM3_HUMAN; HMBS; Hydroxymethylbilane synthase; PBG D; PBG-D; PBGD; Porphobilinogen deaminase; Pre uroporphyrinogen synthase; Pre-uroporphyrinogen synthase; UPS; Uroporphyrinogen I synthase; Uroporphyrinogen I synthetase.
大鼠臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞
兔表皮干細(xì)胞
JF-305人胰腺癌細(xì)胞
MDA-MB-361人乳腺癌細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺(tái)使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。