實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
腎是脊椎動(dòng)物的一種器官，屬于泌尿系統(tǒng)的一部分，負(fù)責(zé)過(guò)濾血液中的雜質(zhì)、維持體液和電解質(zhì)的平衡，后產(chǎn)生尿液經(jīng)尿道排出體外；同時(shí)也具備的功能以調(diào)節(jié)血壓。
周細(xì)胞是一種包圍全身和靜脈中內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞，可以收縮。周細(xì)胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控的血流量。周細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間共同擁有一個(gè)基膜，基膜上有多種細(xì)胞連接，包括多種整合素、神經(jīng)鈣黏素、纖連蛋白以及接合。
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組織來(lái)源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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腎組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1598 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1） 組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常腎組織。
2) 細(xì)胞鑒定：平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）熒光染色為陽(yáng)性。
3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5) 細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
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猴皮質(zhì)醇(COR)elisa分析檢測(cè)試劑盒
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SRPX2蛋白抗體 Anti-SRPX2
復(fù)制激活因子C1抗體 Anti-RFC1
蛋白激酶C結(jié)合蛋白NELL1抗體 Anti-NELL1
磷酸化原癌基因蛋白激酶Yes1抗體 Anti-phospho-YES1(Tyr426)
白介素31受體a抗體
IL31RA
1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框195抗體
C1orf195
通用型細(xì)胞周期流式細(xì)胞分析試劑盒
大鼠組織金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP1)elisa檢測(cè)試劑盒
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小鼠白介素31(IL-31)elisa分析檢測(cè)試劑盒
蛋白質(zhì)磷酸酶1G抗體
PPM1G
肽酰tRNA水解酶ICT1抗體
ICT1
UL16結(jié)合蛋白3抗體 Anti-ULBP3/N2DL3
丙酮酸激酶-M2抗體 Anti-PKM2
磷酸二酯酶7抗體 Anti-PDE7A
磷酸化信號(hào)細(xì)胞活化分子CD150抗體 Anti-phospho-SLAMF1(Tyr281)
PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗牛IgG H&L
大鼠腎周細(xì)胞小鼠噬酸性細(xì)胞趨化因子(Eotaxin)elisa檢測(cè)試劑盒
人U1小核核糖核蛋白A(SNRPA)elisa分析檢測(cè)試劑盒
FKH10; FKHL10; Forkhead (Drosophila) like 10; Forkhead box I1; Forkhead box protein I1; Forkhead like 10; Forkhead related activator 6; Forkhead related transcription factor 6; Forkhead-related protein FKHL10; FREAC 6; FREAC6; Hepatocyte nuclear factor 3 forkhead homolog 3; HFH 3; HFH3; HNF 3/fork head homolog 3; HNF-3 fork-head homolog 3; Human HNF-3 fork-head homolog-3 HFH-3 mRNA complete cds; MGC34197; FOXI1_HUMAN.
大鼠腎周細(xì)胞
人直腸上皮細(xì)胞
LS1034人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
MDST8人結(jié)腸癌細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)使用無(wú)菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開(kāi)腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過(guò)的心臟破碎組織塊經(jīng)過(guò)離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過(guò)夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過(guò)夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過(guò)程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來(lái)，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。