
培養(yǎng)方法與步驟:
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內,影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺內進行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結締組織盡可能去除,然后將肝組織反復剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉,使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細胞接種后一般幾個小時內即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細胞生長良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞,這時可進行傳代培養(yǎng)。
產品名稱
大鼠腎足細胞
產品規(guī)格
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
組織來源
腎臟組織
生長特性
貼壁培養(yǎng)
細胞形態(tài)
不規(guī)則 含足突細胞
分類
大鼠原代細胞
貨號
A01X1590
用途
僅供科研實驗
細胞特性:
1)細胞來源于實驗動物正常腎臟組織。
2)細胞鑒定:廣譜角蛋白(PCK)或WT-1(Wilm'sTumorProtein)熒光染色為陽性。
3)經鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式:不規(guī)則,含足突細胞,貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf 原代腎足 細胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
細胞簡介:
腎小球為血液過濾器,腎小球壁構成過濾膜。腎小球過濾膜從內到外有三層結構:內層為內皮、中層為腎小球基膜、外層為上皮細胞層,上皮細胞又稱足細胞,其不規(guī)則突起稱足突,其間有許多狹小間隙,血液經濾膜過濾后,濾液入腎小球囊。在正常情況下,血液中絕大部分蛋白質不能濾過而保留于血液中,僅小分子物質如尿素、葡萄糖、電解質及某些小分子蛋白能濾過。
腎足細胞即腎小球上皮細胞,它附著于腎小球基底膜的外側,連同腎小球基底膜和腎小球基膜一起構成了腎小球血液濾過屏障。又由于正常成年機體的腎臟足細胞是一種終末分化細胞,體外培養(yǎng)的原代細
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大鼠腎足細胞Mouse Anti-Human IgM / Cy3
FBXL3蛋白抗體
LAMA; LAMA1; Laminin A chain; Laminin subunit alpha-1; Laminin-1 subunit alpha; Laminin-3 subunit alpha; S-laminin subunit alpha; S-LAM alpha; Laminin subunit alpha-1; LAMA1_HUMAN; Laminin-1 subunit alpha; Laminin-3 subunit alpha. Laminin α-1; Laminin α1; Laminin α 1; Laminin subunit α1; Laminin subunit α-1.
大鼠腎足細胞
人直腸平滑肌細胞
LX-2+GFP人肝星形細胞+GFP
ME-180人表皮樣癌細胞
原代細胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時間根據(jù)腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細胞濾網過濾細胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。