細(xì)胞簡(jiǎn)介：
胃壁一般由 3層組織構(gòu)成，內(nèi)層是粘膜層，外層是漿膜層,中間是由平滑肌組成的肌層。成纖維細(xì)胞是結(jié)締組織中常見的細(xì)胞，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞的主要功能之一是合成膠原蛋白及其他細(xì)胞外基質(zhì)，在組織器官纖維化過程中發(fā)揮重要作用。
|
組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
|
胃組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1577 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大鼠的正常胃組織。
2）細(xì)胞鑒定：纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。
3）經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5）細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF 原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺(tái)使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
公司正在出售的產(chǎn)品：
食物D-葡萄糖酸鹽比色法定量檢測(cè)試劑盒
組織血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶1（ACE1）活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法（FRET）定量檢測(cè)試劑盒
人白血病抑制因子受體(LIFR)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子8(FGF8)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
小鼠胰蛋白酶1(trypsin-1)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGE）elisa檢測(cè)試劑盒
高爾基體銅離子熒光（CTAP-1）染色試劑盒
小鼠17-α甲睪酮(17-αMT)elisa檢測(cè)試劑盒
通用型蛋白共沉淀（蛋白G樹脂）試劑盒
人類白細(xì)胞抗原A抗體 HLA Class 1 ABC /HLA ABC
溶質(zhì)載體家族25成員41抗體 SLC25A41
KCTD9蛋白抗體 KCTD9
LARP6蛋白抗體 LARP6
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶10型抗體 ADAMTS10
中心體蛋白CEP170抗體 CEP170
甘氨酸裂解系統(tǒng)H蛋白抗體 GCSH
干擾素調(diào)節(jié)因子9抗體 IRF9/ISGF3
細(xì)胞纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)源蛋白46抗體 IFT46
銜接蛋白β抗體 AP2 beta
α橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白/α-SCA抗體 Sarcomeric Alpha Actinin
γ-原肌球蛋白/原肌球蛋白3抗體 Tropomyosin 3
ATP依賴解旋酶DDX18抗體 DDX18
B細(xì)胞成熟因子（CD269）抗體 BCMA
辣根酶標(biāo)記β2-微球蛋白單克隆抗體 beta 2 Microglobulin (7B5)/HRP
磷酸化cGMP依賴性蛋白激酶1抗體 phospho-cGKI (Thr515)
小鼠金屬硫蛋白1(MT-1)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠胃黏膜成纖維細(xì)胞磷酸二酯酶1（Phosphodiesterase 1）
水質(zhì)污染ATP生物發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒
AB1IP; Amyloid beta A4 precursor protein binding family B member 1 interacting protein; Amyloid beta precursor protein binding family B member 1; APBB1 interacting protein 1; OTTHUMP00000019344; PREL 1; PREL1; Proline rich EVH1 ligand 1; Proline rich protein 73; Rap1 GTP interacting adapter molecule; RAP1 interacting adaptor molecule; RARP 1; RARP1; Retinoic acid responsive proline rich protein 1; AB1IP_HUMAN.
大鼠胃黏膜成纖維細(xì)胞
人真皮成纖維細(xì)胞
PC12低分化+GFP大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞低分化+GFP
MG-63人骨肉瘤細(xì)胞