實驗方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
甲狀腺是人體大的腺。棕紅色，分左右兩葉，中間相連，呈 H形。甲狀腺濾泡是甲狀腺的基本結(jié)構(gòu)單位，濾泡外周是一層排列整齊的上皮細(xì)胞，甲狀腺上皮細(xì)胞是甲狀腺合成和釋放的部位，濾泡腔內(nèi)充滿均勻的膠性物質(zhì)，是甲狀腺復(fù)合物，也是甲狀腺的貯存庫。同時，上皮細(xì)胞具有強大的吸收碘化物的能力。甲狀腺體活動減弱時，上皮細(xì)胞呈扁平狀。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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甲狀腺組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2099 |
僅供科研研究實驗 |
細(xì)胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常甲狀腺組織。
2)細(xì)胞鑒定：甲狀腺球蛋白（Tg）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
Cys-CELISAKit
魚透明質(zhì)酸(HA)elisa分析檢測試劑盒
HA ELISA Kit
人成纖維細(xì)胞生長因子13(FGF-13)elisa分析檢測試劑盒
HumanFGF-13ELISAKit
細(xì)胞/組織氨丙基三乙氧基硅烷載玻片制備試劑盒
人20S蛋白酶體(20SP)elisa分析檢測試劑盒
大鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)elisa檢測試劑盒
小鼠磷酸化核因子-κB(p-NF-κB)elisa檢測試劑盒
KLB蛋白抗體
KLB
肌動蛋白樣蛋白6B抗體
BAF53b
RHOG抗體 Anti-RHOG
環(huán)指蛋白170抗體 Anti-RNF170
胚胎發(fā)育相關(guān)蛋白Nodal抗體 Anti-Nodal
鋅指蛋白198抗體 Anti-ZMYM2/ZNF198
SAMD7蛋白抗體
SAMD7
克侖特羅/瘦肉精抗體
Clenbuterol
神經(jīng)突出相關(guān)蛋白Slitrk1抗體 Anti-Slitrk1
核糖體p70 S6蛋白激酶抗體 Anti-p70 S6 kinase alpha
蛋白酶體PSMα3抗體 Anti-Proteasome 20S alpha 3
酶相關(guān)蛋白1抗體 Anti-TRP1/gp75
兔抗親和素抗體
兔甲狀腺上皮細(xì)胞Rabbit Anti-Dog IgM / Cy7
細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白1抗體
smooth muscle; Basic calponin; Calponin 1; Calponin 2; Calponin 3; Calponin1; Calponin2; Calponin3; Calponin-1; Calponin-2; Calponin-3; Calponin 1 basic smooth muscle; Calponin H1; Calponin H1 smooth muscle; Calponins basic; CNN 1; Cnn1; CNN2_HUMAN; Sm Calp; SMCC.
兔甲狀腺上皮細(xì)胞
人扁桃體成纖維細(xì)胞
HCC1143人乳腺癌細(xì)胞
sh-sy5y人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時間根據(jù)正常細(xì)胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細(xì)胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。