實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
腎單位是腎結構和功能的基本單位，由腎小體和腎小管組成。腎小管與腎小囊壁層相連的一條細長上皮性小管，具有重吸收和排泌作用 .腎小管按不同的形態(tài)結構，分布位置和功能分成三部分；近端小管、髓袢和遠端小管。
近端小管在對腎小球超濾液中蛋白質、 Na+、HCO3-、Cl-、K+、Ca2+、PO43-,水與有機溶質（葡萄糖與氨基酸）的重吸收中發(fā)揮著重要作用，約1/2的超濾液在近端小管處重吸收。
|
組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
|
腎臟組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2096 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常腎臟組織。
2)細胞鑒定：細胞角蛋白-18（CK-18）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：鋪路石狀細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF 原代上皮細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
CRELISAKit
驢孕/孕酮(PROG)elisa分析檢測試劑盒
PROG ELISA kit
人低分子質量蛋白7/β型蛋白酶體9(LMP7/PSMB9)elisa分析檢測試劑盒
HumanLMP7/PSMB9ELISAKit
人腦血液補體蛋白C3比濁法定量檢測試劑盒
人s腺苷型半胱氨酸(SAH)elisa分析檢測試劑盒
大鼠白介素18（IL－18）elisa檢測試劑盒
小鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質抗體IgG(MPO-ANCA IgG)elisa檢測試劑盒
JAK和微管相互作用蛋白2/JAK和微管相互作用蛋白2抗體
JAKMIP2
神經(jīng)元電壓門控鈣通道γ6抗體
CACNG6
大鼠D-二聚體(D2D)elisa檢測試劑盒
小鼠凝血因子Ⅳ(FⅣ)elisa分析檢測試劑盒
人CC趨化因子5(CCL5/D17S136E/SCYA5)elisa檢測試劑盒免費代測
（CM transferrin -zymography電泳分析試劑盒（MMP7）
RAS的GTP酶激活蛋白抗體
RASA2
腎細胞癌抗原NYREN 45抗體
KCTD3
線粒體脫偶連蛋白2抗體 Anti-UCP-2
脈周蛋白1抗體（胃癌抗原蛋白Ga50） Anti-PPHLN1
原鈣粘附蛋白α4抗體 Anti-PCDHA4
泛素蛋白抗體 Anti-Ubiquitin
PE-Cy3標記的驢抗兔IgG H&L
兔腎近端小管上皮細胞小鼠花生四烯酸(AA)elisa檢測試劑盒
脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)elisa分析檢測試劑盒
ENSG00000196977; Hepatocellular carcinoma associated antigen HCA25a; LOC728375.
兔腎近端小管上皮細胞
大鼠羊膜間充質干細胞
小鼠正常肝細胞；NCTC1469 （種屬鑒定）
SW480人結腸腺癌細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。