實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
腹腔主動(dòng)脈是人體的大動(dòng)脈，直接延續(xù)于發(fā)自左心室的主動(dòng)脈，胸腔主動(dòng)脈，沿脊柱左側(cè)下行，主要負(fù)責(zé)腹腔臟器和腹壁的血液供應(yīng)。動(dòng)脈發(fā)生的一個(gè)主要因素是由于血管平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)變成為了具有繁殖能力的表型。
近期的研究表明平滑肌細(xì)胞能表達(dá)鈣離子通道， ICAM-1和VCAM-1。其中ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)可能是造成血管壁炎癥反應(yīng)，并進(jìn)一步造成血管的原因 。
因此，對(duì)動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞的體外培養(yǎng)和研究可用來(lái)發(fā)現(xiàn)和確定新的血管的靶向方法。
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組織來(lái)源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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腹腔主動(dòng)脈組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1784 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常腹腔主動(dòng)脈組織。
2)細(xì)胞鑒定：平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF原代平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為該細(xì)胞的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠內(nèi)向整流型鉀離子通道亞家族J成員5(KCNJ5)elisa檢測(cè)試劑盒
平滑肌細(xì)胞相關(guān)蛋白4抗體
MFSD1
1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框177抗體
C1orf177
組織血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶（ACE）總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
人多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
大鼠干細(xì)胞生長(zhǎng)因子(SCF)elisa檢測(cè)試劑盒
魚(yú)胞漿型磷脂酶A2A(cPLA2A)elisa分析檢測(cè)試劑盒
磷酸化磷脂酰肌醇激酶調(diào)節(jié)亞單位gamma抗體
phospho-PIK3R3 (Tyr199)
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體
CCDC5
Toll樣受體9抗體 Anti-TLR9/CD289
多腺苷二磷酸多聚酶16抗體 Anti-PARP16
神經(jīng)叢蛋白A4抗體 Anti-Plexin A4
細(xì)胞外基質(zhì)蛋白2抗體 Anti-SPARCL1/Ecm2
Cy5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG H&L
Rabbit Anti-Guinea Pig IgG H&L / Cy5
胰腺?gòu)椥缘鞍酌?span>3B抗體
Elastase 3B
鋅指蛋白BED4抗體 Anti-ZBED4
生殖細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白NANOS2抗體 Anti-NANOS2
腫瘤血管內(nèi)皮調(diào)節(jié)蛋白Robo4抗體 Anti-Robo4
骨形態(tài)發(fā)生抑制蛋白SOST抗體 Anti-Sclerostin
大鼠17羥皮質(zhì)類(lèi)固醇(17-OHCS)elisa分析檢測(cè)試劑盒
小鼠腹腔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞綿羊基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3)elisa分析檢測(cè)試劑盒
WB二抗稀釋液 100ml
Carcinoembryonic antigen; Carcinoembryonic antigen related cell adhesion molecule 5; Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5; CD66e; CD66e antigen; CEACAM5; CEAM5_HUMAN; DKFZp781M2392; Meconium antigen 100.
小鼠腹腔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
大鼠腎小管上皮細(xì)胞
幼蚊細(xì)胞；C6/36
XWLC-05云南宣威人肺腺癌細(xì)胞系
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)使用無(wú)菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開(kāi)腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過(guò)的心臟破碎組織塊經(jīng)過(guò)離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過(guò)夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過(guò)夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過(guò)程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來(lái)，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。