實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
頸靜脈存在于脊椎動(dòng)物頸部的靜脈。血管內(nèi)皮細(xì)胞層是血液和其它組織的天然屏障。內(nèi)皮細(xì)胞同時(shí)會(huì)合成和分泌凝血和纖維蛋白溶解系統(tǒng)的增強(qiáng)和抑制物，以及影響血小板粘附和聚集的媒介物。它們同時(shí)也會(huì)分泌控制細(xì)胞增殖的蛋白來維持血管壁的健康。
內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)分泌 t-PA和PAI-1等抗血栓因子以及響應(yīng)TNF-α，繼而分泌細(xì)胞因子GM-CSF，表達(dá)ICAM-1表面抗體，產(chǎn)生大量的一氧化氮和endothelin。原代靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)系統(tǒng)有助于在特定的體外條件下研究血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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頸靜脈組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1793 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）或血管假性血友病因子（vWF）熒光染色為陽性。
3）經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5）細(xì)胞生長方式：梭形，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為該細(xì)胞的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
酒類氨一步法定量檢測試劑盒
細(xì)胞甘油激酶（Glycerol kinase）活性酶連續(xù)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒
人白介素22(IL-22)elisa分析檢測試劑盒
大鼠丙二酸單酰輔酶A脫羧酶(MLYCD)elisa分析檢測試劑盒
小鼠血管**素1(ANG-1)elisa檢測試劑盒
組織RSK3激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
人基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）elisa檢測試劑盒
大鼠肌**抑制素(MSTN)elisa檢測試劑盒
豬α1酸性糖蛋白(α1-AGP)elisa分析檢測試劑盒
熱休克蛋白70家族13抗體 STCH/HSPA13
溶血磷脂酸受體蛋白2/EDG4抗體 LPA2
IWS1蛋白抗體 IWS1
KIAA1731蛋白抗體 KIAA1731
真核翻譯起始因子4B單克隆抗體 EIF4B
植烷酰輔酶A羥化酶2相互作用蛋白抗體 PHYHIP
鈣調(diào)蛋白激酶CaMK1D抗體 CAMK1D
肝細(xì)胞粘附分子抗體 HEPACAM
細(xì)胞色素P450 4Z1抗體 CYP4Z1
細(xì)胞周期調(diào)控因子34 CDC34
ZDHHC6蛋白抗體 ZDHHC6
β葡萄糖醛酸苷酶抗體 beta glucuronidase
ASMTL蛋白抗體 ASMTL
BEN結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體 BEND5
跨膜蛋白SEMA4A抗體 SEMA4A
磷酸二酯酶4A抗體 PDE4A
小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)elisa檢測試劑盒
小鼠頸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Rat LDL-IC ELISA Kit
山羊白介素1β(IL-1β)elisa分析檢測試劑盒
Fanconi Anemia Complementation Group F; FACF; FAF; Fanconi anemia group F protein; MGC126856; Protein FACF; FANCF_HUMAN.
小鼠頸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
大鼠脾源性內(nèi)皮祖細(xì)胞
ECC12人胃癌細(xì)胞
其它
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺(tái)使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。