實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
腦血管周細胞分布于腦組織的微血管系統(tǒng)中，調節(jié)血管形成、穩(wěn)定和功能的關鍵因素。周細胞典型的特征是有一個突出的核，核周圍胞漿較少，有許多平行于微血管長軸的突起，這些突起逐漸變細并包繞微血管腔，起到對管腔的支持作用。
同時，一個周細胞可以通過伸展的突起與微循環(huán)中的多個接觸。此外，周細胞和內皮細胞間的相互作用在血管新生中具有極為重要的作用。
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組織來源 |
產品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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腦組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1945 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常腦組織。
2)細胞鑒定：平滑肌肌動蛋白（α-SMA）熒光染色為陽性。
3)經鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：長梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 delf 原代 周 細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產品：
人P0蛋白抗體(IgG)elisa分析檢測試劑盒
樁蛋白抗體
Leupaxin
羧肽酶X(M14家族2)抗體
CPXM2
植物鈉/鉀ATP酶（Na＋/K＋ －ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒
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NME6
GRAMD1B蛋白抗體
GRAMD1B
轉錄因子E2F二聚體蛋白2抗體 Anti-TFDP2/DP2
磷酸化蛋白激酶R抗體 Anti-Phospho-PKR (Thr446/451)
多聚合酶g抗體 Anti-PAPOG
核轉錄因子SOX4抗體 Anti-SOX4
磷酸化乙酰輔酶A羧化酶抗體
phospho-Acetyl Coenzyme A Carboxylase beta (Ser220)
嗅覺受體52N4抗體
OR52N4
WDFY3蛋白抗體 Anti-WDFY3
NOGO相互作用線粒體蛋白1抗體 Anti-NIMP/RTN4IP1
環(huán)指蛋白19B抗體 Anti-RNF19B
SCN2A抗體 Anti-SCN2A
大鼠γ-氨基丁酸受體亞基α1(GABRA1)elisa分析檢測試劑盒
小鼠腦血管周細胞小鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)elisa檢測試劑盒
大鼠游離三碘甲狀腺原氨酸(fT3)elisa檢測試劑盒
Calponin homology domain-containing protein 1; CHDC1; KIAA1016; Leucine-rich repeat and calponin homology domain-containing protein 1 antibody Lrch1; LRCH1_HUMAN; Neuronal protein 81; NP81.
小鼠腦血管周細胞
大鼠腦血管成纖維細胞
HEY人**別漿液性卵巢癌細胞
人肺癌細胞;NCI-H3255
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經過的心臟破碎組織塊經過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據細胞數量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。