實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
心臟壁主要由心肌構(gòu)成，心室壁比心房壁厚，其中，左心室比右心室壁厚，在心臟的四個腔中，左心室的心肌。心肌的工作細(xì)胞包括心房肌和心室肌。心肌細(xì)胞為短柱狀，一般只有一個細(xì)胞核，心肌細(xì)胞之間有閏盤結(jié)構(gòu)。心房與心室的心肌層不直接相連，它們分別起止于心房和心室交界處的纖維支架，形成各自獨(dú)立的肌性壁，從而保證心房和心室各自進(jìn)行獨(dú)立的收縮舒張，以推動血液在心臟內(nèi)的定向流動。
臨床研究表明，心肌病是一組異質(zhì)性心肌，表現(xiàn)為心室不適當(dāng)?shù)姆屎窕驍U(kuò)張，可引起心血管性死亡或進(jìn)展性心力衰竭。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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心臟組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1774 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）組織來源于實(shí)驗(yàn)動物的正常心臟組織。本細(xì)胞為終末分化細(xì)胞，增殖能力很弱，建議客戶收到細(xì)胞后直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，不要進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)。
2)細(xì)胞鑒定：肌球蛋白重鏈(Myosin heavy chain)熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長方式：柱狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF 原代 心肌 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
AsAbELISAKit
大鼠B因子(BF)elisa分析檢測試劑盒
BF ELISA Kit
人肝細(xì)胞生長因子受體(c-MET/HGFR)elisa分析檢測試劑盒
HumanHGFRELISAKit
磷酸鈉協(xié)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 Anti-SLC34A2
腎素結(jié)合蛋白抗體 Anti-RENBP
核孔蛋白NUP160抗體 Anti-NUP160
信號傳導(dǎo)抑制蛋白WD重復(fù)蛋白2抗體 Anti-WSB2/WD SOCS box protein 2
異質(zhì)核核糖核蛋白U樣蛋白1抗體
HNRPUL1
細(xì)胞周期后期促進(jìn)蛋白亞基11抗體
APC11
雞5羥色胺/血清素/血清胺(5HT/ST)elisa分析檢測試劑盒
組織α-L-巖藻糖苷酶（AFU）熒光定量檢測試劑盒
小鼠防御素β1(DEFβ1)elisa檢測試劑盒
大鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)elisa檢測試劑盒
原鈣粘蛋白β2抗體
PCDHB2
組蛋白H3.3C抗體
Histone H3.3C
磷酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體 Anti-Phospho-TORC2 (Ser171)
腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體1抗體 Anti-PACAP R1/PACAP receptor 1
蛋白激酶A調(diào)節(jié)亞基a1抗體 Anti-PRKAR1
突觸囊泡蛋白抗體 Anti-SYNPR/Synaptoporin
PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgG H&L
小鼠心室心肌細(xì)胞北方雜交試劑盒
石蠟切片組織PDGF-A蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒
Dynactin 6; Dynactin subunit p27; Novel RGD containing protein; Protein WS3; WS 3; WS3.
小鼠心室心肌細(xì)胞
大鼠肌腱細(xì)胞
LC-2/ad人肺癌腺癌細(xì)胞
人胚肺成纖維細(xì)胞；WI-38 (STR)
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時間根據(jù)正常細(xì)胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細(xì)胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。