實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
近年來，有關(guān)干細(xì)胞的研究是生物技術(shù)領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。胚胎成纖維細(xì)胞具有相對(duì)容易獲得，增殖能力強(qiáng)等特點(diǎn)，因此胚胎成纖維細(xì)胞常作為哺乳動(dòng)物干細(xì)胞培養(yǎng)的飼養(yǎng)層細(xì)胞，主要分泌謀學(xué)細(xì)胞因子，如成纖維細(xì)胞生長因子，白血病抑制因子等，以促進(jìn)干細(xì)胞增殖及抑制分化。
該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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胚胎組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2316 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1） 細(xì)胞來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常胚胎組織。
2) 細(xì)胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5) 細(xì)胞生長方式：長梭狀細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF 原代 成纖維 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
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化妝品糖精（saccharin）含量紫外光譜法定量檢測試劑盒
動(dòng)物組織鎂ATP酶（Mg＋＋ －ATPase）活性比色法定量
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大鼠胱抑素D(CST5)elisa分析檢測試劑盒
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冰凍切片線粒體內(nèi)膜功能/膜電位紅色熒光（TMRE）測定試劑盒
大鼠脂蛋白脂肪酶（LPL）elisa檢測試劑盒
組織相容性抗原H抗體 HLA-H
1號(hào)染色體開放閱讀框130抗體 C1orf130
環(huán)指蛋白105抗體 RNF105
肌氨酸脫氫酶抗體 SARDH
PerCP-Cy5.5標(biāo)記人CD105單克隆抗體 human CD105/PerCP-Cy5.5
PE標(biāo)記人TCR α/β單克隆抗體 human TCR α/β/PE
生長分化因子7抗體 GDF7
雙鏈RNA結(jié)合蛋白Staufen抗體 Staufen
E選擇素抗體 E-Selectin
FARSLB蛋白抗體 FARSLB
磷酸化細(xì)絲蛋白A抗體 phospho-Filamin A (Ser1083)
磷酸化自噬相關(guān)蛋白1抗體 Phospho-ATG1 (Ser556)
大鼠細(xì)小病毒H-1株(H-1)抗體 Parvovirus Capsid protein VP1
蛋白聚糖Versican抗體 Versican
鋅指蛋白635抗體 POGZ/ZNF635
嗅覺受體52I1抗體 OR52I1
小鼠葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)elisa檢測試劑盒
鴨胚胎成纖維細(xì)胞Goat Anti-Mouse IgM / PE
髓系細(xì)胞觸發(fā)受體樣轉(zhuǎn)錄因子2抗體
CBF5; CBF5 homolog; Cbf5p homolog; DKC 1; DKC; Dkc1; DKC1_HUMAN; DKCX; Dyskeratosis congenita 1; Dyskeratosis congenita 1 dyskerin; Dyskerin; H/ACA ribonucleoprotein complex subunit 4; NAP 57; NAP57; NAP-57; NOLA 4; NOLA4; Nopp140 associated protein of 57 kDa; Nopp140-associated protein of 57 kDa; Nucleolar protein family A member 4; Nucleolar protein NAP57; snoRNP protein DKC1; XAP 101; XAP101.
鴨胚胎成纖維細(xì)胞
大鼠骨骼肌細(xì)胞
M14人黑色素瘤細(xì)胞
人食管癌細(xì)胞；TE-13 (STR)
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺(tái)使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。